Question

【題目】高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選了高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖1所示。請分析回答下列問題：

（1）按功能分，Ⅰ號培養(yǎng)基稱為______；該培養(yǎng)基中必須以______作為唯一碳源。對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，目的是______。

（2）過程①②合稱為______法，若該過程所得平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0.2mL，稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的細菌數(shù)約為______個。

（3）在1號培養(yǎng)基上挑出能產(chǎn)生淀粉酶的嗜熱菌菌落的鑒別方法是培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的______；也可將得到的菌懸液轉(zhuǎn)接于同時含有葡萄糖和淀粉作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，看到如圖2所示情況，可判斷圖中______的菌落含有所需菌種。

（4）將高溫淀粉酶應用于生產(chǎn)，需要對其進行固定化處理，對酶活性影響最小的處理方法是______。

Answer 1

【答案】選擇培養(yǎng)基 淀粉 防止雜菌污染（或殺死培養(yǎng)基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或使培養(yǎng)基中所有微生物永遠喪失生長繁殖能力） 稀釋涂布平板 2.5×107 透明圈 周圍不顯藍色 物理吸附法

【解析】

接種微生物的方法主要是稀釋涂布平板法和平板劃線法；稀釋涂布線法：逐步稀釋菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)；平板劃線法由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落．高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌的一個設備，一般壓力在100KPa，溫度在121℃的條件下，維持15～30分鐘用于培養(yǎng)基的滅菌；用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法；火焰灼燒可以迅速徹底地滅菌，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針等。

（1）由圖可知，Ⅰ號培養(yǎng)基的作用是篩選能高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，因此屬于選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基需要以淀粉為唯一碳源。滅菌的目的是使培養(yǎng)基中所有微生物永遠喪失生長繁殖能力（或殺死培養(yǎng)基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或防止雜菌污染）。

（2）Ⅰ號培養(yǎng)基上菌落分布均勻，說明過程①②采用的是稀釋涂布平板法。每毫升樣品中的細菌數(shù)約為50÷0.2×105=2.5×107個。

（3）根據(jù)題意可知，Ⅰ號培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的透明圈可以鑒別嗜熱菌菌落。淀粉與碘液反應呈藍色，但如果淀粉分解菌產(chǎn)生的淀粉酶將淀粉水解后就不能呈藍色，則會出現(xiàn)無色的透明圈，故圖乙所示情況中無藍色透明圈的菌落含有所需菌種。

（4）固定化酶通常用物理吸附法和化學結(jié)合法，其中對酶活性影響最小的處理方法是物理吸附法。