Question

4．研究被石油污染過的土壤中細(xì)菌數(shù)量，并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌．為了分離和純化高效分解石油的細(xì)菌，科研人員利用被石油污染過的土壤，對分解石油的細(xì)菌進(jìn)行分離和提純，回答下列相關(guān)問題．
（1）配置好的培養(yǎng)基通�？梢允褂酶邏赫羝麥缇�．培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分包括水、無機(jī)鹽、碳源和氮源等．其中碳源應(yīng)該以石油為唯一碳源．
（2）純化菌種時，為了得到單個菌落，常采用的接種方法有兩種，即平板劃線法和稀釋涂布平板法．
（3）該實(shí)驗(yàn)中使用的是固體培養(yǎng)基，要得到固體培養(yǎng)基，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入瓊脂做凝固劑．
（4）為了對土壤中分解石油的細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，科研人員把不同稀釋度的菌液進(jìn)行涂布（每個平板加0.1毫升菌液）、培養(yǎng)、計(jì)數(shù)．統(tǒng)計(jì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)稀釋倍數(shù)為10³的三個平板中，菌落數(shù)分別為45、38、37．問每克土壤中能分解石油的細(xì)菌數(shù)約為4×10⁵個．酵母菌細(xì)胞中有成形的細(xì)胞核這是酵母菌與分解石油的細(xì)菌在結(jié)構(gòu)上的最大區(qū)別．
（5）若用¹⁵N對分解石油的細(xì)菌的DNA進(jìn)行標(biāo)記，然后把這個細(xì)菌放在含¹⁴N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，讓其連續(xù)分裂四次，則后代中，含¹⁵N的DNA的細(xì)菌和含¹⁴N的DNA的細(xì)菌之比為1：8．若把分解石油的細(xì)菌的DNA提取出來用DNA酶處理得到的產(chǎn)物是脫氧核糖核苷酸．

Answer 1

分析 1、無菌操作技術(shù)有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌．
2、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法：由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落．
稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞．計(jì)數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)．
3、DNA分子的復(fù)制方式是半保留復(fù)制．

解答 解：（1）培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分包括水、無機(jī)鹽、碳源和氮源等．篩選出能分解石油的細(xì)菌，則培養(yǎng)基中的碳源應(yīng)該以石油為唯一碳源．
（2）純化菌種時，常采用的接種方法有兩種，即平板劃線法和稀釋涂布平板法．
（3）該實(shí)驗(yàn)中使用的是固體培養(yǎng)基，要得到固體培養(yǎng)基，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入瓊脂做凝固劑．
（4）根據(jù)題意，每升水樣中的活菌數(shù)為（45+38+37）÷0.1×1000×10³=4×10⁵個．酵母菌屬于真核生物，細(xì)菌屬于原核生物，真核細(xì)胞與原核細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上最主要的區(qū)別是真核細(xì)胞有成形的細(xì)胞核．
（5）DNA分子的復(fù)制方式為半保留復(fù)制，且一個細(xì)菌含有一個擬核DNA分子．若用¹⁵N對分解石油的細(xì)菌的DNA進(jìn)行標(biāo)記，然后把這個細(xì)菌放在含¹⁴N培養(yǎng)基中培養(yǎng)，讓其連續(xù)分裂四次，則后代中，含¹⁵N的DNA的細(xì)菌有2個，含¹⁴N的DNA的細(xì)菌有2⁴，因此兩者之比為2：16=1：8．DNA的基本組成單位是脫氧核苷酸，因此把分解石油的細(xì)菌的DNA提取出來用DNA酶處理得到的產(chǎn)物是脫氧核糖核苷酸．
故答案為：
（1）高壓蒸汽、氮源、石油
（2）平板劃線法、稀釋涂布平板法
（3）瓊脂
（4）4×10⁵、成形的細(xì)胞核
（5）1：8、脫氧核糖核苷酸

點(diǎn)評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)、DNA復(fù)制等知識，要求考生識記培養(yǎng)基的成分、種類及作用；識記接種微生物接種常用的兩種方法及無菌技術(shù)；掌握DNA分子半保留復(fù)制的相關(guān)計(jì)算，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．