Question

【題目】制備單克隆抗體通常選用細胞融合技術，將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，融合成功的細胞經過篩選就是所需要的雜交瘤細胞�？茖W家從某無限增殖細胞的細胞質中分離出無限增殖調控基因(prG)，該基因能激發(fā)細胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了新思路。某國家重點實驗室準備探索利用基因工程生產單克隆抗體，請回答下列問題：

(1)實驗室已經獲得無限增殖調控基因(prG)，可以用PCR技術進行擴增，94℃高溫使DNA雙鏈打開，這一步是打開____鍵，這一過程在細胞內是通過____酶實現(xiàn)的，DNA分子復制時需要引物，若將一個DNA分子復制3次，需要在緩沖液中至少加入____個引物。

(2)該基因工程操作的核心是__________，本研究中受體細胞為__________，欲將目的基因轉入受體細胞，常采用__________方法。若實驗成功，則受體細胞既，能__________，又能__________。

Answer 1

【答案】 氫 解旋 14 基因表達載體的構建 （經抗原刺激）的B淋巴細胞（或漿細胞） 顯微注射 無限增殖 產生特異性抗體

【解析】試題分析: PCR全稱為聚合酶鏈式反應，是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術。PCR的原理是DNA復制，需要的條件包括：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），PCR擴增DNA的過程包括：高溫變性、低溫復性、中溫延伸過程。因此,利用PCR技術擴增目的基因的過程中，目的基因受熱形成單鏈并與引物結合，在Taq聚合酶的作用下延伸形成DNA。

(1) 用PCR技術擴增目的基因，94℃高溫使DNA雙鏈之間的氫鍵打開，而這一過程在細胞內是通過解旋酶實現(xiàn)的。DNA分子復制時子鏈延伸需要引物，若將一個DNA分子復制3次，由于共需要形成2+4+8=14條子鏈，所以在緩沖液中至少加入14個引物。

(2)基因工程操作的四個基本步驟是：獲取目的基因、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞和目的基因的檢測與鑒定。其中核心步驟是基因表達載體的構建。抗體是由已獲得免疫的(經抗原刺激)B細胞分泌的，將目的基因導入動物細胞常采用的方法是顯微注射法，若實驗成功，則受體細胞既能無限增殖，又能產生特異性抗體。