Question

【題目】轉(zhuǎn)基因抗除草劑玉米培育過(guò)程如下，請(qǐng)回答下列問(wèn)題。

（Ampx表示氨卡青霉素抗性基因 Tetr表示四環(huán)素抗性基因）

（1）為了讓目的基因與質(zhì)粒DNA合理重組，同時(shí)便于篩選重組質(zhì)粒，選用的限制酶最可能為_______。

（2）外源基因?qū)�入受體菌后需要進(jìn)行篩選，如用含氨卡青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，能篩選出含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒和_________的單菌落，若要篩選含有重組質(zhì)粒的單菌落，還需要使用含有_____-的固體培養(yǎng)基。

（3）含有目的基因的農(nóng)桿菌侵染愈傷組織后，篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織，需要使用含______的選擇培養(yǎng)基。由愈傷組織形成完整植株的途徑有兩條，一條是器官發(fā)生途徑，另一條是______途徑。具體通過(guò)哪一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中________的種類及其濃度配比。

（4）得到再生植株后，要確認(rèn)目的基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)此再生植株中該基因的_______。如果檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，再在田間試驗(yàn)檢測(cè)植株的抗性。

Answer 1

【答案】酶F、酶G 質(zhì)粒 四環(huán)素 除草劑 胚狀體發(fā)生途徑 激素 表達(dá)產(chǎn)物

【解析】

依題圖可知，構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程中的關(guān)鍵步驟，其中所選的限制酶既能切下目的基因，又不會(huì)破壞質(zhì)粒上的標(biāo)記基因；需要根據(jù)標(biāo)記基因所表達(dá)的標(biāo)記性狀篩選含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞；根據(jù)目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)出產(chǎn)物來(lái)判斷轉(zhuǎn)基因抗除草劑玉米是否培育成功。以此基因工程中相關(guān)知識(shí)做出解答。

（1）依題圖可知，為了讓目的基因與質(zhì)粒DNA合理重組，同時(shí)便于篩選重組質(zhì)粒，做到既能得到目的基因，又不破壞質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，所以選用的限制酶最可能為酶F和酶G。

（2）識(shí)圖可知，表達(dá)載體上含有完整的氨卡青霉素抗性基因而四環(huán)素抗性基因被破壞，所以用含氨卡青霉素的培養(yǎng)基對(duì)受體菌進(jìn)行篩選，能篩選出含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒和質(zhì)粒的單菌落，若要篩選含有重組質(zhì)粒的單菌落，還需要使用含有四環(huán)素的固體培養(yǎng)基。

（3）依題文可知，篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織即含有目的基因的愈傷組織，需要使用含除草劑的選擇培養(yǎng)基。結(jié)合題干信息可知，愈傷組織形成完整植株的途徑：器官發(fā)生途徑和胚狀體發(fā)生途徑。具體通過(guò)哪一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中激素的種類及其濃度配比。

（4）根據(jù)基因工程的實(shí)施步驟可知，目的基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測(cè)再生植株中該基因的表達(dá)產(chǎn)物是否出現(xiàn)。