Question

14．如圖甲、乙，箭頭表示限制酶的酶切位點，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，neo^R表示青霉素抗性基因．現有MboI、SamI兩種限制酶，它們的識別序列和酶切位點分別為↓GATC、CCC↓GGG．據圖回答下列問題：
（1）獲取目的基因是基因工程的第一步，目的基因主要是指編碼蛋白質的基因，也可以是一些具有調控作用的因子．在目的基因的一條鏈上，相鄰的兩個堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接．
（2）利用限制酶MboI和SamI分別對甲、乙進行酶切，若用E•coli DNA連接酶進行連接，則可以得到1種重組質粒；若用T₄DNA連接酶進行連接，則可以得到2種重組質粒．
（3）要使目的基因在受體細胞中，能正常表達和發(fā)揮作用，表達載體必須具備的結構是啟動子、終止子．

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運載體：常用的運載體：質粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．
2、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）目的基因主要是指編碼蛋白質的基因，也可以是一些具有調控作用的因子．由于目的基因是DNA的片段，所以在目的基因的一條鏈上，相鄰的兩個堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接．
（2）由于E•coliDNA連接酶只能連接雙鏈DNA的黏性末端，而T₄DNA連接酶既可以連接雙鏈DNA的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA的齊平末端，所以若用E•coli DNA連接酶進行連接，則可以得到1種重組質粒；若用T₄DNA連接酶進行連接，則可以得到2種重組質粒．
（3）要使目的基因在受體細胞中，能正常表達和發(fā)揮作用，表達載體必須具備的結構是啟動子、終止子，此外還有目的基因和標記基因．
故答案為：
（1）編碼蛋白質的基因  脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖
（2）1   2
（3）啟動子、終止子

點評 本題結合題圖，考查基因工程的相關知識，意在考查學生分析題圖提取有效信息的能力；能理解所學知識要點，運用所學知識解決問題的能力．