Question

【題目】藏紅花素是藏紅花中的主要活性成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗高血壓、抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗抑郁等多種藥理作用。2019年7月，中科院天津生物所研究員利用大腸桿菌合成藏紅花素方面取得進(jìn)展。下圖為藏紅花素合成過程圖，請回答有關(guān)問題：

（1）圖中靶DNA片段是從基因文庫中獲取，基因組文庫與cDNA文庫的主要區(qū)別是______。

（2）在藏紅花植株內(nèi)獲得靶DNA分子后用PCR技術(shù)擴(kuò)增目標(biāo)片段，基本原理是_________，Taq酶催化 DNA 子鏈的延伸方向?yàn)?/span> 5'—3'，應(yīng)選擇與模板結(jié)合的引物是（填字母）________。若向反應(yīng)體系加入 a 個(gè)靶 DNA 分子，經(jīng) 4 次循環(huán)獲得目標(biāo) DNA 片段所占的比例_______。

（3）為保證目的基因在大腸桿菌中能夠表達(dá)，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒應(yīng)含有以下_________部分（請選擇）。

①目的基因 ②引物 ③標(biāo)記基因 ④啟動(dòng)子 ⑤終止子 ⑥終止密碼子 ⑦起始密碼子 ⑧復(fù)制原點(diǎn)

（4）上述過程中，大腸桿菌成為生產(chǎn)藏紅花素的細(xì)胞工廠�；�因工程中用原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是____________。

（5）檢測目的基因是否發(fā)揮功能的第一步是____________，檢測方法是分子雜交技術(shù)，若出現(xiàn)雜交帶，則表明成功，具體操作過程為____________。

Answer 1

【答案】基因組文庫有啟動(dòng)子、內(nèi)含子（或cDNA文庫中沒有啟動(dòng)子、內(nèi)含子） DNA 復(fù)制 引物 B、引物 E 1/4 ① ③ ④ ⑤ ⑧ 繁殖快，多為單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對較少 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mRNA 從轉(zhuǎn)基因生物中提取出 mRNA，用標(biāo)記的目的基因做探針與 mRNA 雜交

【解析】

1、基因工程又叫DNA重組技術(shù)，是指按照人們的意愿，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。

2、基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。

3、基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣，將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)，個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）基因組文庫包含該生物的全部遺傳信息，而cDNA文庫是指由mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA構(gòu)建出來的，故它們的主要區(qū)別是基因組文庫有啟動(dòng)子、內(nèi)含子，cDNA文庫中沒有啟動(dòng)子、內(nèi)含子。

（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增的基本原理是DNA 復(fù)制，Taq酶催化 DNA 子鏈的延伸方向?yàn)?/span> 5'—3'，故要擴(kuò)展中間的目的基因應(yīng)選擇與模板結(jié)合的引物是引物 B、引物 E。由于題圖中的引物E和引物B均不在該片段的端點(diǎn)，因此第一輪循環(huán)后，得到的兩DNA片段中兩條脫氧核苷酸鏈都不等長，通過自行繪圖可推知，第二輪中亦不會(huì)出現(xiàn)等長的，只有第三輪才開始出現(xiàn)等長的目標(biāo)DNA片段，若向反應(yīng)體系加入 a 個(gè)靶 DNA 分子，經(jīng) 4 次循環(huán)后共獲得DNA片段16a個(gè)，其中等長的目標(biāo)DNA片段4a個(gè)，經(jīng) 4 次循環(huán)獲得目標(biāo) DNA 片段所占的比例1/4。

（3）為保證目的基因在大腸桿菌中能夠表達(dá)，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒應(yīng)含有以下部分：①目的基因、③標(biāo)記基因、④啟動(dòng)子、⑤終止子、⑧復(fù)制原點(diǎn)。

（4）基因工程中用原核生物作為受體細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是繁殖快，多為單細(xì)胞，遺傳物質(zhì)相對較少。

（5）檢測目的基因是否發(fā)揮功能的第一步是檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mRNA，檢測方法是分子雜交技術(shù)，若出現(xiàn)雜交帶，則表明成功，具體操作過程為從轉(zhuǎn)基因生物中提取出 mRNA，用標(biāo)記的目的基因做探針與 mRNA 雜交。