Question

回答有關基因工程的問題：
（1）基因工程的基本操作程序包括四個步驟．其中目的基因的獲取方法有從

 

中獲取、利用PCR技術

 

、通過

 

用化學方法直接人工合成；基因工程的核心是基因表達載體的構建，其目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時使目的基因

 

；目的基因進入受體細胞并在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程，稱為

 

；檢查基因工程是否成功的關鍵步驟是

 

．
（2）構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產生黏性末端，也可能產生

 

末端．若要在限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應選擇能使二者產生

 

（相同、不同）黏性末端的限制酶．
（3）利用大腸桿菌生產人胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，其作用是

 

．在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用

 

處理大腸桿菌，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用標記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術稱為

 

．為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻譯成

 

，常用抗原-抗體雜交技術．
（4）將某目的基因導入植物細胞采用最多的方法是

 

，一般先要將目的基因插入農桿菌Ti質粒的

 

上，然后用該農桿菌感染植物細胞，并將目的基因插入植物細胞中的

 

上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達載體的構建，③將目的基因導入受體細胞，④目的基因的檢測與鑒定．
第一步：目的基因的獲取
原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法． 
第二步：基因表達載體的構建
（1）目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用．
（2）組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因
第三步：將目的基因導入受體細胞
轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程．
第四步：目的基因的檢測和表達
（1）首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術．
（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，方法是用標記的目的基因作探針與mRNA雜交．
（3）最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交．
（4）有時還需進行個體生物學水平的鑒定．如轉基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀．

解答： 解：（1）獲取目的基因可從基因文庫中獲取，可利用PCR技術擴增，可通過DNA合成儀人工發(fā)合成．構建基因表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用．目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程稱為轉化．檢查基因工程是否成功的關鍵步驟是目的基因的檢測與鑒定．
（2）限制酶切割DNA可獲得黏性末端或平末端，同種限制酶切割可獲得相同的黏性末端．
（3）啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識別和結合的部位，作用是驅動基因轉錄（出mRNA）．目的基因導入微生物細胞常用 Ca²⁺ 處理，使其成為感受態(tài)細胞．檢測目的基因是否轉錄出mRNA，方法是用標記的目的基因作探針與mRNA雜交，檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交．
（4）目的基因導入植物細胞常用農桿菌轉化法，農桿菌的Ti質粒的T-DNA可轉移至受體細胞，并整合到受體細胞的染色體上．
故答案為：
（1）基因文庫   擴增    DNA合成儀   能夠表達和發(fā)揮作用  轉化  目的基因的檢測與鑒定
（2）平   相同
（3）驅動基因轉錄（出mRNA）   Ca²⁺ （DNA-RNA）分子雜交技術    蛋白質
（4）農桿菌轉化法   T-DNA     染色體的DNA

點評：本題考查基因工程，理解基因工程的操作步驟是解題的關鍵，