Question

【題目】如圖為某種質(zhì)粒的簡圖，小箭頭所指分別為限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點，P為轉(zhuǎn)錄的啟動部位。已知目的基因的兩端有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點，受體細胞為無任何抗藥性的原核細胞。下列有關敘述正確的是(　　)

A. 將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切，在DNA連接酶作用下，生成由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有兩種

B. DNA連接酶的作用是將酶切后得到的黏性末端連接起來形成一個重組質(zhì)粒，該過程形成兩個磷酸二酯鍵

C. 為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自身環(huán)化，酶切時可選用的酶是EcoRⅠ和BamHⅠ

D. 能在含青霉素的培養(yǎng)基中生長的受體細胞表明該目的基因已成功導入該細胞

Answer 1

【答案】C

【解析】本題結(jié)合圖形考查基因表達載體的構(gòu)建，要求考生理解構(gòu)建基因表達載體的方法，明確構(gòu)建的基因表達載體應含有哪些部件及這些部件的功能，此題難度稍大。

根據(jù)題意，目的基因的兩端有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點，將含有目的基因的DNA與用EcoRⅠ酶切，會得到含目的基因的DNA片段和不含目的基因的DNA片段；根據(jù)質(zhì)粒的簡圖可知，將質(zhì)粒用EcoRⅠ酶切，會得到與質(zhì)粒周長等長的鏈狀DNA；因此將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切，在DNA連接酶作用下，可生成含目的基因的原DNA片段兩個之間進行連接、由含目的基因的DNA片段與質(zhì)粒周長等長的鏈狀DNA相互連接形成的鏈狀DNA、二倍于原質(zhì)粒周長的環(huán)狀DNA三種類型，A錯誤；DNA連接酶的作用是將酶切后得到的黏性末端連接起來形成一個重組質(zhì)粒，該過程形成四個磷酸二酯鍵，B錯誤；EcoRⅠ和BamHⅠ的識別序列不同，獲取目的基因和切割質(zhì)粒時，同時選用EcoRⅠ和BamHⅠ切割，目的基因兩端形成的末端不同，切割開的質(zhì)粒兩端形成的末端不同，再用DNA連接酶連接，可以防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自身環(huán)化，C正確；題圖顯示，在構(gòu)建基因表達載體的過程中質(zhì)粒中的青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因都不會被破壞，因此能在含青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基中生長的受體細胞不能表明目的基因已成功導入該細胞，D錯誤。