Question

13．科研人員將病毒外殼蛋白（CP）基因轉(zhuǎn)移到甜椒體內(nèi)，培育出的抗病毒甜椒具有很好的抗病毒效果．請(qǐng)回答下列有關(guān)抗病毒甜椒培育過程的問題：
（1）獲取含氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒：先在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌，然后從菌體中分離出含氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒．
（2）獲取CP基因：從感染病毒的植物體內(nèi)獲得mRNA，然后用反轉(zhuǎn)錄的方法獲得cDNA（填“基因組”或“cDNA”）文庫(kù)．基因組文庫(kù)與cDNA文庫(kù)相比，兩者最顯著的區(qū)別是cDNA文庫(kù)不含啟動(dòng)子和終止子．
（3）構(gòu)建基因表達(dá)載體：經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得的目的基因的兩端是平末端，需要用T₄DNA連接酶將其與含平末端的載體連接．
（4）導(dǎo)入受體細(xì)胞：甜椒為雙子葉植物，科研人員常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法法導(dǎo)入，然后將受感染的組織細(xì)胞培育成愈傷組織，再經(jīng)再分化培育成轉(zhuǎn)基因甜椒．
（5）目的基因的襝測(cè)與鑒定：目的基因在真核細(xì)胞中能否穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體的DNA上．

Answer 1

分析 1、DNA連接酶根據(jù)酶的來源不同分為兩類：E．coliDNA連接酶、T₄DNA連接酶．這二者都能連接黏性末端，此外T₄DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時(shí)的效率比較低．
2、基因工程中獲取目的基因的方法有三種：從基因文庫(kù)中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因、人工合成法：包括反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法．3、cDNA文庫(kù)和基因文庫(kù)的比較表：

文庫(kù)類型	cDNA	基因組文庫(kù)
文庫(kù)大小	小	大
基因中啟動(dòng)子	無	有
基因中內(nèi)含子	無	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

解答 解：（1）細(xì)菌的質(zhì)粒中可能會(huì)含有氨芐青霉素抗性基因，因此要獲取含氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒，先在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)細(xì)菌，能夠生存的細(xì)菌中就含有該基因，然后從菌體中分離出含氨芐青霉素抗性基因的質(zhì)粒．
（2）獲取CP基因可以利用反轉(zhuǎn)錄法，即從感染病毒的植物體內(nèi)獲得mRNA，然后用反轉(zhuǎn)錄的方法獲得cDNA文庫(kù)．基因組文庫(kù)與cDNA文庫(kù)相比，兩者最顯著的區(qū)別是cDNA文庫(kù)不含啟動(dòng)子和終止子．
（3）經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得的目的基因的兩端是平末端，需要用T₄DNA連接酶將其與含平末端的載體連接．
（4）甜椒為雙子葉植物，一般采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，然后將受感染的組織細(xì)胞經(jīng)脫分化培育成愈傷組織，再經(jīng)再分化培育成轉(zhuǎn)基因甜椒．
（5）目的基因在真核細(xì)胞中能否穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體的DNA上．
故答案為：
（1）氨芐青霉素
（2）mRNA    cDNA    cDNA文庫(kù)不含啟動(dòng)子和終止子
（3）T₄DNA
（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法     再分化
（5）目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體的DNA上

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問題，掌握部分基因文庫(kù)和基因組文庫(kù)的區(qū)別，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．