Question

20．基因工程基本操作流程如圖，請(qǐng)據(jù)圖分析回答：
（1）圖中A是運(yùn)載體；在基因工程中，需要在限制性核酸內(nèi)切酶酶的作用下才能完成剪切過(guò)程，過(guò)程②的所需要的酶拼接的化學(xué)鍵是磷酸二酯鍵
（2）過(guò)程③若導(dǎo)入的是動(dòng)物細(xì)胞則使用的方法應(yīng)該是：顯微注射技術(shù)，若導(dǎo)入雙子葉植物細(xì)胞最常用的方法是：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）目的基因?qū)�入到受體細(xì)胞后，需要進(jìn)行目的基因的檢測(cè)與鑒定，如果要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體上是否插入了目的基因，一般使用DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、分析題圖：圖示是基因工程的基本操作流程，其中A為運(yùn)載體；①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�人受體細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定．

解答 解：（1）分析圖解，基因工程中需要將目的基因和運(yùn)載體構(gòu)建成重組質(zhì)粒，因此圖中A是運(yùn)載體；在基因工程中，需要在限制酶的作用下才能完成剪切過(guò)程；過(guò)程②需要DNA連接酶，該酶拼接的是磷酸二酯鍵．
（2）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是纖維注射法；將目的基因?qū)�入雙子葉植物最有效的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，常用DNA分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）運(yùn)載體    限制性核酸內(nèi)切酶      磷酸二酯鍵
（2）顯微注射技術(shù)      農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）DNA分子雜交

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合基因工程的基本操作流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具、操作步驟及應(yīng)用；明確目的基因可以在受體細(xì)胞中得到表達(dá)的生理基礎(chǔ)．