Question

18．人們希望能借助纖維素酶將地球上最豐富、最廉價(jià)的可再生資源纖維素轉(zhuǎn)化為能直接利用的能源和資源．纖維素酶可以從能分解纖維素的細(xì)菌培養(yǎng)液中提取．某同學(xué)設(shè)計(jì)了如下分離土壤中纖維素分解菌的實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→鑒別培養(yǎng)．
（1）請(qǐng)補(bǔ)充題干“梯度稀釋”中的實(shí)驗(yàn)流程：梯度稀釋?zhuān)徽也坏胶线m的取樣環(huán)境，可采取的辦法是將富含纖維素的物質(zhì)埋在土壤中．
（2）選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度；研究人員用纖維素、硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，其中加入的纖維素為微生物的生長(zhǎng)提供碳源．
（3）為了鑒別纖維素分解菌和進(jìn)一步純化菌種，可以培養(yǎng)基上加入剛果紅染液，將篩選獲得的菌液稀釋后用涂布平板法接種到鑒別培養(yǎng)基上，然后挑選產(chǎn)生透明圈的菌落作為菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)．
（4）擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中需要對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)．取0.2mL樣品，用固體培養(yǎng)基對(duì)其培養(yǎng)，最后統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板，菌落數(shù)分別是180、200、160．則樣品中微生物的數(shù)量為900個(gè)/mL．該統(tǒng)計(jì)結(jié)果低于 （低于、高于）實(shí)際值．

Answer 1

分析 從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選纖維素分解菌需要用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，纖維素分解菌可以用剛果紅染液進(jìn)行鑒別，在培養(yǎng)基中加入剛果紅染液，在其菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈．

解答 解：（1）題干所給的實(shí)驗(yàn)流程缺少梯度稀釋?zhuān)�如果找不到合適的取樣環(huán)境，可采取的辦法是將富含纖維素的物質(zhì)埋在土壤中對(duì)目的微生物進(jìn)行富集培養(yǎng)．
（2）選擇培養(yǎng)的目的是增加纖維素分解菌的濃度，意在其他微生物的生長(zhǎng)．纖維素是培養(yǎng)基中唯一的碳源．
（3）篩選獲得的菌液稀釋后用涂布平板的方法接種到鑒別培養(yǎng)基上，在纖維素分解菌的菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈．
（4）計(jì)算微生物的數(shù)量應(yīng)取三個(gè)平板的平均值，即（180+200+160）÷0.2=900個(gè)/mL．由于一個(gè)菌落可能是一個(gè)或多個(gè)細(xì)菌長(zhǎng)成的，因此該結(jié)果會(huì)低于實(shí)際值．
故答案為：
（1）梯度稀釋　 將富含纖維素的物質(zhì)埋在土壤中　
（2）增加纖維素分解菌的濃度　碳源
（3）涂布平板　透明圈
（4）900  低于

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查纖維素分解菌的篩選與分離，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)目的微生物的篩選與分離，提高相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技能．