Question

如圖是將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞，培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的常用操作程序．根據(jù)圖示過程和所學(xué)知識(shí)，將下面操作程序補(bǔ)充完整．

（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體：在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)常要用到工具酶．常用的DNA連接酶有

 

和

 

，后者也可以用于平末端的連接．如果目的基因要在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，基因表達(dá)載體構(gòu)建時(shí)要將目的基因與

 

、標(biāo)記基因和終止子等組件重組在一起，載體一般要有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)便于

 

．
（2）獲得足夠數(shù)量的受精卵：為了獲得足夠數(shù)量的受精卵，先利用

 

刺激供體雌性鼠超數(shù)排卵，然后從

 

沖取

 

，再完成體外受精．
（3）將目的基因?qū)�入�?xì)胞：確定目的基因是否整合到染色體上，一般需用

 

做探針，與轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞中提取的

 

進(jìn)行DNA分子雜交．
（4）早期胚胎培養(yǎng)：早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液成分一般比較復(fù)雜，除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外，還需要添加

 

、

 

，氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及動(dòng)物血清等物質(zhì)．當(dāng)胚胎培養(yǎng)到適宜的階段時(shí)，可進(jìn)行胚胎移植．
（5）胚胎移植：在胚胎移植前要對(duì)接受胚胎的受體進(jìn)行

 

處理．移植后，還要對(duì)受體雌鼠進(jìn)行

 

檢查．
（6）胚胎干細(xì)胞形態(tài)上具有

 

的特性，它在添加

 

的培養(yǎng)液中可以維持不分化的狀態(tài)．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),胚胎移植

專題：

分析：圖示為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的培育過程，據(jù)圖分析可知：先將小鼠超數(shù)排卵處理，體內(nèi)受精后（雌雄原核）獲得受精卵，然后用顯微注射技術(shù)將目的基因注入受體細(xì)胞，再經(jīng)過胚胎移植技術(shù)，將早期轉(zhuǎn)基因的胚胎發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，據(jù)此答題即可．

解答： 解：（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，常用的DNA連接酶有E?coliDNA連接酶（大腸桿菌DNA連接酶）、T₄-DNA連接酶，二者均可以連接粘性末端，其中T₄-DNA連接酶還可以連接平末端；如果目的基因要在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，需將目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子結(jié)合，基因表達(dá)載體上還需標(biāo)記基因和終止子等組件，載體一般要有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)便于插入目的基因．
（2）為了獲得足夠數(shù)量的受精卵，常用促性腺激素處理供體雌鼠，使其超數(shù)排卵，從輸卵管中沖取卵子（卵母細(xì)胞），再完成體外受精即可．
（3）確定目的基因是否整合到染色體上，一般需用放射性同位素標(biāo)記（熒光分子標(biāo)記）的目的基因（單鏈），與轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞中提取的基因組DNA（核DNA），進(jìn)行DNA分子雜交，通過是否產(chǎn)生雜交鏈來檢測(cè)．
（4）早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液成分，除無機(jī)鹽和有機(jī)鹽外，還需要添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，并需添加動(dòng)物血清等天然成分．  
（5）在胚胎移植前，為了使胚胎移植前后處于相同的生理狀態(tài)，要對(duì)接受胚胎的受體進(jìn)行同期發(fā)情處理；移植后，要對(duì)受體雌鼠進(jìn)行是否妊娠檢查．
（6）胚胎干細(xì)胞具有體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯等特點(diǎn)，添加抑制分化的因子可以只分裂不分化．
故答案為：
（1）E?coliDNA連接酶（大腸桿菌DNA連接酶） T₄-DNA連接酶   乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子  目的基因的插入
（2）促性腺激素       輸卵管       卵子（卵母細(xì)胞）
（3）放射性同位素標(biāo)記（熒光分子標(biāo)記）的目的基因（單鏈）    基因組DNA（核DNA）
（4）維生素      激素     
（5）同期發(fā)情     妊娠
（6）體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯   抑制因子

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程、胚胎移植等知識(shí)，結(jié)合體內(nèi)、體外受精進(jìn)行考察，意在考查考生對(duì)所學(xué)知識(shí)的掌握、獲取圖文信息能力和分析推理能力的培養(yǎng)．