Question

【題目】回答與植物克隆和動物克隆有關的問題：

研究人員欲利用抗蟲基因，通過基因工程培育抗蟲植物。圖1和圖2分別表示了抗蟲基因和農桿菌Ti質粒的限制性核酸內切酶識別位點和抗生素抗性基因（PstⅠ、SmaⅠ、AluⅠ表示限制性核酸內切酶切割位點；amp為氨芐青霉素抗性基因，tet為四環(huán)素抗性基因）

請回答：

（1）為獲得大量抗蟲基因，且保證形成重組質粒時，目的基因以唯一方向接入，可選用______（填限制性核酸內切酶的種類）分別切割目的基因和Ti質粒，再用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子，再與經過______處理的______（A．有amp和tet B．有amp，無tet C．無amp，有tet D．無amp和tet）的農桿菌液混合，使重組DNA進入農桿菌，再利用農桿菌將目的基因導入植物細胞并整合到細胞DNA中。

（2）抗蟲基因亦可通過______方法導入植物細胞，抗蟲基因進入細胞后，可利用______整合到植物細胞DNA中。

（3）將含有導入了目的基因的愈傷組織試管放在______上，進行液體懸浮培養(yǎng)獲得______，進而培育成抗蟲植株

Answer 1

【答案】SmaI和PstI CaCl2 D 顯微注射 轉座因子 搖床 胚性細胞

【解析】

1、由題干信息“PstⅠ、SmaⅠ、AluⅠ表示限制性核酸內切酶切割位點”，不能選用AluⅠ，這樣會破壞目的基因。

2、標記基因的作用是：為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。

（1）分析圖一可知，獲取目的基因可用限制酶SmaI和PstI或只使用PstI，切割質粒時必需保證標記基因不能全部被破壞，因此為獲得大量抗蟲基因，且保證形成重組質粒時，目的基因以唯一方向接入，可選用Sma I和PstI分別切割目的基因和Ti質粒，再用DNA連接酶連接，形成重組DNA分子，此時的重組DNA分子中的標記基因為amp；再與經過CaCl2處理（使其成為感受態(tài)細胞）的無amp和tet的農桿菌液混合，使重組DNA進入農桿菌。再利用農桿菌轉入培養(yǎng)的玫瑰細胞，使目的基因導入玫瑰細胞中。

（2）抗蟲基因亦可通過顯微注射方法導入植物細胞，抗蟲基因進入細胞后，可利用轉座因子整合到植物細胞DNA中。

（3）將含有導入了目的基因的玫瑰細胞的試管放在搖床上震蕩，進行液體懸浮培養(yǎng)獲得胚性細胞，進而培育成抗蟲玫瑰，原理是植物細胞具有全能性