Question

6．埃博拉病毒（EBOV）是一種能引起人類和靈長(zhǎng)類動(dòng)物發(fā)生埃博拉出血熱（EBHF）的烈性病毒，其遺傳物質(zhì)為RNA，利用相應(yīng)的生物學(xué)技術(shù)制備出抗EBOV的單克隆抗體，可快速檢測(cè)EBOV．請(qǐng)回答下列問題．
（1）途徑一：在制備抗EBOV的單克隆抗體的過(guò)程中，先給小鼠注射一種純化的EBOV蛋白，一段時(shí)間后，從小鼠的脾臟中獲取B細(xì)胞，將獲得的細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞．誘導(dǎo)細(xì)胞融合的化學(xué)方法一般是用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑來(lái)誘導(dǎo)融合．
（2）途徑二：可將無(wú)限增殖的基因用顯微注射技術(shù)導(dǎo)入能產(chǎn)生抗EBOV抗體的小鼠免疫細(xì)胞中，以便源源不斷地產(chǎn)生抗EBOV的單克隆抗體，此項(xiàng)工程所需要的工具是限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和運(yùn)載體．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答 解：（1）制備單克隆抗體時(shí)，首先給小鼠注射抗原，然后從小鼠的脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B細(xì)胞，與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞．誘導(dǎo)細(xì)胞融合的化學(xué)方法一般是用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑來(lái)誘導(dǎo)融合．
（2）基因工程中，將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常用顯微注射法．此項(xiàng)工程所需要的工具是限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和運(yùn)載體．
故答案為：
（1）B    骨髓瘤         聚乙二醇（PEG）
（2）顯微注射       限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和運(yùn)載體

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、單克隆抗體的制備等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識(shí)記單克隆抗體的制備過(guò)程，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．