Question

19．科研人員擬將已知的花色基因（目的基因）轉人矮牽牛的核基因組中，培育新花色的矮牽牛．請回答：
（1）為了獲得大量的目的基因，將其與含有抗生素抗性基因的質粒DNA形成重組DNA，再與經A（A．氯化鈣、B．氯化鈉、C．蔗糖、D．葡萄糖）處理的大腸桿菌液混合，使重組DNA進入大腸桿菌．
（2）從擴大培養(yǎng)的大腸桿菌中提取含有目的基因的DNA，用限制性核酸內切酶分別切割含目的基因的 DNA和農桿菌的Ti質粒，然后用DNA連接酶連接，形成重組DNA并導入農桿菌．
（3）取田間矮牽牛的幼嫩葉片，經自來水沖洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用無菌水清洗，為轉基因的受體材料消毒．
（4）將消毒后的矮牽牛葉片剪成小片，在含有目的基因的農桿菌溶液中浸泡后，取出并轉移至加有適當配比生長調節(jié)劑的MS培養(yǎng)基（含蔗糖、瓊脂和抗生素，下同）上，使葉小葉先脫分化形成愈傷組織．再將其轉移至另一培養(yǎng)基誘導形成芽，芽切割后轉移至B（A．LB培養(yǎng)基    B．MS培養(yǎng)基+適宜濃度NAA  C．MS培養(yǎng)基+適宜濃度BA   D．NAA/BA小于1的MS培養(yǎng)基）上生根，形成完整植株．
（5）取出試管苗，在適宜的光照、溫度和80%以上的濕度等條件下進行煉苗．提取葉片組織的DNA，采用PCR技術擴增目的基因，鑒定目的基因是否成功導入．
（6）為判斷本研究是否達到預期目的，可比較轉基因植株和非轉基因植株的花色性狀．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）將目的基因導入微生物細胞常用感受態(tài)轉化法，即需要利用鈣離子處理使受體細胞變成感受態(tài)細胞．因此，為了獲得大量的目的基因，將其與含有抗生素抗性基因的質粒DNA形成重組DNA，再與經氯化鈣處理的大腸桿菌液混合，使重組DNA進入大腸桿菌．
（2）基因工程的工具酶包括限制性核酸內切酶和DNA連接酶．
（3）取田間矮牽牛的幼嫩葉片，經自來水沖洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸鈉浸泡，最后用無菌水清洗，作為轉基因的受體材料．
（4）將消毒后的矮牽牛葉片剪成小片，在含有目的基因的農桿菌溶液中浸泡后，取出并轉移至加有適當配比生長調節(jié)劑的MS培養(yǎng)基（含蔗糖、瓊脂和抗生素，下同）上，使葉小葉先脫分化形成愈傷組織．再將其轉移至另一培養(yǎng)基誘導形成芽，芽切割后轉移至MS培養(yǎng)基+適宜濃度NAA上生根，形成完整植株．
（5）取出試管苗，在適宜的光照、溫度和80%以上的濕度等條件下進行煉苗．提取葉片組織的DN A，采用PCR技術擴增目的基因，鑒定目的基因是否成功導入．
（6）為判斷本研究是否達到預期目的，可比較轉基因植株和非轉基因植株的花色性狀．
故答案為：
（1）A    
（2）限制性核酸內切酶    DNA連接酶
（3）酒精    無菌水  
（4）愈傷組織    B   
（5）濕度   擴增     
（6）花色

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及意義，掌握基因工程采用的工具及具體操作步驟，能結合所學的知識準確分析各題．