(1)假定已經(jīng)得到少量海蜇綠色熒光蛋白基因，并知道該基因兩端的一部分核苷酸序列，則可以利用_____技術(shù)來擴(kuò)增并獲取該基因。該項(xiàng)技術(shù)中需要用到的酶是___________________。
(2)將綠色熒光蛋白基因?qū)�入雌蠶體內(nèi)的基本過程是：
①．用同一種_______酶同時(shí)處理運(yùn)載體和綠色熒光蛋白基因，構(gòu)建基因表達(dá)載體；
②．采用______技術(shù)將基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入到從雌蠶體內(nèi)獲取的一個(gè)體細(xì)胞核中，再通過細(xì)胞核____獲取含有綠色熒光蛋白基因且全能性好的重組細(xì)胞（相當(dāng)于受精卵）；
③．重組細(xì)胞經(jīng)過培育獲得能育的在紫外線下發(fā)出綠色熒光的雌蠶。為了在家蠶的后代中能較快的區(qū)分出雌雄蟲，應(yīng)將綠色熒光蛋白基因?qū)�人并整合到_______染色體上(蠶的性別決定類型為zw型，即雌蠶的性染色體為zw，雄蠶的性染色體為zz)。

(1)影響圖中曲線ab段和bc段葉片光合作用強(qiáng)度的要環(huán)境因素分別是_______和_______。 
(2)如在e點(diǎn)后再次增大光照強(qiáng)度，則曲線能否持續(xù)上升？_______，原因是_______。
(3)為提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，除提高光合作用效率外，還需提高作物的抗寒抗逆性。研究發(fā)現(xiàn)在某些深海魚中存在抗凍蛋白基因afp，對提高農(nóng)作物的抗寒能力有較好的應(yīng)用價(jià)值，通過基因工程可以將抗凍蛋白基兇afp導(dǎo)入植物細(xì)胞從而提高抗寒能力。該基因工程的核心步驟是________，利用_______技術(shù)可以獲得大量目的基因。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞最常采用的方法是___________。

A．用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸
B．用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體
C．將重組DNA分子導(dǎo)入煙草原生質(zhì)體
D．用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞

請根據(jù)以上圖表回答下列問題。
(1)在采用常規(guī)PCR方法擴(kuò)增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點(diǎn)是____________。
(2)PCR過程中退火(復(fù)性)溫度必須根據(jù)引物的堿基數(shù)量和種類來設(shè)定。表1為根據(jù)模板設(shè)計(jì)的兩對引物序列，圖2為引物對與模板結(jié)合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？_________。
(3)圖1步驟③所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？________。
(4)為將外源基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯，圖1步驟⑥轉(zhuǎn)基因所用的細(xì)菌B通常為__________。
(5)對符合設(shè)計(jì)要求的重組質(zhì)粒T進(jìn)行酶切。假設(shè)所用的酶均可將識別位點(diǎn)完全切開，請根據(jù)圖1中標(biāo)示的酶切位點(diǎn)和表2所列的識別序列，對以下酶切結(jié)果作出判斷。
①．采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_______種DNA片段。
②．采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切得到________種DNA片段。

(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，可用一種或多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實(shí)例中，應(yīng)該選用限制酶_______，分別對_______進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為_______種。
(2)培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有_______，作為標(biāo)記基因。
(3)研究人員通常采用______法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用_______技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。
(4)利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的________________。

(4)要使運(yùn)載體與抗蟲基因連接，首先應(yīng)使用______進(jìn)行切割。假如運(yùn)載體被切割后，得到的分子末端序列為，則能與該運(yùn)載體連接的抗蟲基因分子末端是________。采用_______將運(yùn)載體與抗蟲基因連接，連接后得到的DNA分子稱為________。
(5)將連接得到的DNA分子導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，然后用該菌去感染棉花細(xì)胞，利用_______的表達(dá)來檢測目的基因已經(jīng)成功導(dǎo)入。再利用_________技術(shù)將受體細(xì)胞誘導(dǎo)成具有抗蟲能力的棉花小植株。
(6)基因工程成功的標(biāo)志是__________的成功表達(dá)。

A．圖中①②在基因工程中依次叫做基因表達(dá)載體、目的基因
B．形成③的操作中使用的酶有限制酶、DNA聚合酶和DNA連接酶
C．由④培育至⑤過程中，依次經(jīng)歷了脫分化、再分化過程
D．在⑤幼苗中檢測到抗枯萎病基因標(biāo)志著成功培育新品種

(1)若限制酶Ⅰ的識別序列和切點(diǎn)是-↓GATC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點(diǎn)是-G↓GATCC-，那么在①過程中，應(yīng)用限制酶______切割質(zhì)粒，用限制酶______切割抗蟲基因。①過程在______(體內(nèi)/體外)進(jìn)行。
(2)將通過②過程得到的大腸桿菌涂布在含有______的培養(yǎng)基上，能夠生長說明已導(dǎo)入了普通質(zhì)�；蛑亟M質(zhì)粒，反之則說明沒有導(dǎo)入，該培養(yǎng)基從功能方面屬于________培養(yǎng)基。
(3)重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是______________。
(4)經(jīng)篩選分析，該植株細(xì)胞中含有一個(gè)攜帶抗蟲基因的DNA片段，因此可以把它看做是雜合子。理論上該轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的F₁代中，仍具有抗蟲特性的植株占總數(shù)的_______________。
(5)⑤過程所用技術(shù)稱為_________，從遺傳學(xué)角度來看，根本原因是根細(xì)胞具有_____________。

(1)綠色熒光蛋白基因在該實(shí)驗(yàn)中是作為_______基因。圖中通過過程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。限制性內(nèi)切酶I的識別序列和切點(diǎn)是-G'GATCC-，請畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割所形成的黏性末端的過程：___________。
(2)過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時(shí)，采用最多也最有效的方法是________。
(3)如果將切取的GFP基因與抑制小豬抗原表達(dá)的基因一起構(gòu)建到載體上，GFP基因可以作為基因表達(dá)載體上的標(biāo)記基因，其作用是____________。
(4)目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是(用數(shù)字表示)：_____________。
①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸；②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)；③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾(合成)；④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白。
(5)在培養(yǎng)重組細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)液中通常含有___________、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。
(6)以上培育過程中應(yīng)用到的生物技術(shù)有__________等(至少答出三項(xiàng))。