Question

【題目】用噬菌體抗體庫技術(shù)獲得人的單克隆抗體的方法是：將人抗體基因插入噬菌體載體，然后讓該噬菌體感染大腸桿菌，抗體可能和噬菌體蛋白以融合蛋白的形式附著在噬菌體表面，也可能通過大腸桿菌分泌出去。回答下列問題：

（1）獲取人抗體基因時，可從人的_________細(xì)胞中獲取總RNA，反（逆）轉(zhuǎn)錄成cDNA，再通過PCR技術(shù)擴(kuò)增抗體基因。在PCR反應(yīng)體系中，需加入________作為合成DNA的原料。

（2）在抗體基因與噬菌體基因之間設(shè)計了一個終止密碼子（UAA或UAG或UGA）的對應(yīng)序列，在終止密碼子突變型的菌株表達(dá)時，抗體基因的表達(dá)產(chǎn)物是_______（填“融合蛋白”或“分泌型抗體”）。

（3）下圖表示噬菌體抗體庫中編碼某抗體的mRNA的部分堿基序列：

圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含__________個密碼子，如虛線框后的序列未知，預(yù)測虛線框后的第一個密碼子最多有________種。

（4）在噬菌體抗體庫的構(gòu)建過程中，理論上可以不利用Ca2+處理大腸桿菌，依據(jù)是___________。與利用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體相比，用該技術(shù)省去的步驟是__________，使制備更簡單易行。從噬菌體抗體庫中篩選特異性抗體的方法是__________。

Answer 1

【答案】漿 四種脫氧核苷酸 融合蛋白 8 13 噬菌體可以侵染大腸桿菌，將重組DNA分子注入大腸桿菌 動物細(xì)胞融合（或已免疫的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合或漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合） 抗原—抗體雜交（法）

【解析】

本題主要考查基因工程和細(xì)胞工程與單克隆抗體制備的相關(guān)知識，要求學(xué)生熟知基因工程的操作過程、以及單克隆抗體的制備的過程，旨在考查考生的理解能力與知識的綜合運(yùn)用能力。

（1）抗體基因在效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）中表達(dá)，故應(yīng)從人的漿細(xì)胞中獲取總RNA，反（逆）轉(zhuǎn)錄成cDNA，再通過PCR技術(shù)擴(kuò)增抗體基因；DNA的原料為四種脫氧核苷酸；

（2）在抗體基因與噬菌體基因之間設(shè)計了一個終止密碼子（UAG）的對應(yīng)序列，終止密碼子為翻譯的終點(diǎn)，由于終止密碼子突變型菌株轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物無原來設(shè)計的終止密碼子，因此抗體基因的表達(dá)產(chǎn)物是融合蛋白（抗體和噬菌體的蛋白質(zhì)）；

（3）mRNA上三個相鄰堿基為一個密碼子，故圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含8個密碼子；該片段后面的第一個堿基為U，所以后面的密碼子最多可能為4×4=16種，根據(jù)題干信息及題中給出的mRNA序列可知，虛線框后第一個密碼子不可能是終止密碼子，故實(shí)際上最多有16-3=13種密碼子；

（4）Ca2+處理大腸桿菌的目的是使大腸桿菌易于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子，但由于噬菌體可以侵染大腸桿菌，可將重組DNA分子注入大腸桿菌，因此在噬菌體抗體庫的構(gòu)建過程中，理論上可以不利用Ca2+處理大腸桿菌；利用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的單克降抗體，需要對骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞進(jìn)行融合，然后篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，但用噬菌體抗體庫技術(shù)獲得人的單克隆抗體省去了動物細(xì)胞融合環(huán)節(jié)，使制備更簡單易行；從噬菌體抗體庫中篩選特異性抗體的方法是抗原—抗體雜交（法）。