Question

15．嚴重復合型免疫缺陷癥的基因治療方法是：先從病人體內(nèi)獲得淋巴細胞進行體外培養(yǎng)，然后將腺苷酸脫氨酶基因利用逆轉(zhuǎn)錄病毒作為運載體轉(zhuǎn)移到淋巴細胞，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細胞增殖培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)．回答下列問題：
（1）體外培養(yǎng)淋巴細胞，應保證處于無菌、無毒環(huán)境，在合成培養(yǎng)基中通常加入適量的血清（血漿）等天然成分，培養(yǎng)應在含5%CO₂的培養(yǎng)箱中進行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（2）該基因治療過程是在逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆（反）轉(zhuǎn)錄酶作用下，使RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA，與目的基因整合后插入到淋巴細胞基因組中．基因表達載體除含有目的基因外，還必須含有啟動子、終止子等控制基因表達的信號序列．
（3）淋巴細胞主要在人體的骨髓（器官）中分化形成，并參與人體的特異性免疫．
（4）淋巴細胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用放射性同位素（熒光）標記的腺苷酸脫氨酶基因作為探針，進行DNA分子雜交檢測．

Answer 1

分析 1、動物細胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
2、動物細胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．
3、基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因
4、基因探針--用放射性同位素（或熒光分子）標記的含有目的基因DNA片段．

解答 解：（1）體外培養(yǎng)淋巴細胞，應保證處于無菌、無毒的環(huán)境，在合成培養(yǎng)基中通常加入適量的血清、血漿等天然成分，培養(yǎng)應在含5%CO₂的培養(yǎng)箱中進行，CO₂的作用是維持培養(yǎng)液的PH．
（2）該基因治療過程是在逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶作用下，使RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA，與目的基因整合后插入到淋巴細胞基因組中．基因表達載體除含有目的基因外，還必須含有啟動子、終止子等控制基因表達的信號序列．
（3）淋巴細胞主要在人體的骨髓中分化形成，并參與人體的特異性免疫．
（4）淋巴細胞的DNA上是否插入了目的基因，一般用放射性同位素（熒光）標記的腺苷酸脫氨酶基因作為探針，進行DNA分子雜交檢測．
故答案為：
（1）無菌、無毒        血清（血漿）      維持培養(yǎng)液的PH
（2）逆（反）轉(zhuǎn)錄酶       啟動子、終止子
（3）骨髓        特異性
（4）放射性同位素（熒光）

點評 本題考查動物細胞培養(yǎng)、基因工程等相關知識，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力．