Question

【題目】乙型肝炎病毒（HBV）可引發(fā)慢性肝炎、肝硬化等疾病，乙型肝炎病毒調(diào)節(jié)蛋白HBx對(duì)HBV復(fù)制有重要作用。圖1表示在PCR過(guò)程中HBx基因與引物的關(guān)系，圖2表示利用中國(guó)倉(cāng)鼠生產(chǎn)乙肝病毒HBx蛋白流程圖�；卮鹣铝袉�(wèn)題：

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增圖1中HBx基因時(shí)，在第______次循環(huán)結(jié)束后即可出現(xiàn)兩條鏈等長(zhǎng)的目的基因片段。圖2中②過(guò)程需要用到限制酶和DNA連接酶，兩種酶作用的化學(xué)鍵______（填“相同”或“不相同”）。

（2）基因表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用______法，檢測(cè)HBx基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA時(shí)，需要用______做探針，再與相應(yīng)的物質(zhì)雜交。

（3）④過(guò)程體外受精前需要對(duì)精子進(jìn)行______處理，卵母細(xì)胞需要發(fā)育到______期，才具備與精子受精的能力。⑤過(guò)程將獲得的早期胚胎移植到經(jīng)過(guò)______處理的受體倉(cāng)鼠子宮內(nèi)。

（4）在⑤步聚操作前對(duì)胚胎進(jìn)行了檢查和篩選，發(fā)現(xiàn)有些胚胎因?yàn)橥庠椿�因的插入而死亡外源基因插入�?dǎo)致胚胎死亡的原因可能是______。

Answer 1

【答案】3 相同 顯微注射 放射性同位素標(biāo)記的含目的基因的DNA片段 獲能 MⅡ中 同期發(fā)情 外源基因的插入導(dǎo)致胚胎正常發(fā)育所需的基因不能表達(dá)

【解析】

基因工程的操作步驟：目的基因的獲取、構(gòu)建基因表達(dá)載體、把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)和鑒定。

圖2中：①獲取目的基因、②構(gòu)建基因表達(dá)載體、④體外受精、⑤胚胎移植。

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增的過(guò)程為，由此可知，圖1中HBx基因時(shí)，在第3次循環(huán)結(jié)束后即可出現(xiàn)兩條鏈等長(zhǎng)的目的基因片段。圖2中②過(guò)程需要用到限制酶和DNA連接酶，兩種酶作用的化學(xué)鍵相同，都是磷酸二酯鍵。

（2）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；檢測(cè)HBx基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA時(shí)，應(yīng)該采用分子雜交技術(shù)，需要用放射性同位素標(biāo)記的含目的基因的DNA片段做探針，再與RNA進(jìn)行雜交，看是否出現(xiàn)雜交帶。

（3）④為體外受精，該過(guò)程前需要對(duì)精子進(jìn)行獲能處理，卵母細(xì)胞需要發(fā)育到MⅡ中期，才具備與精子受精的能力。⑤過(guò)程將獲得的早期胚胎移植到經(jīng)過(guò)同期發(fā)情處理的受體倉(cāng)鼠子宮內(nèi)，以保證胚胎移植入相同的生理環(huán)境。

（4）胚胎移植前對(duì)胚胎進(jìn)行了檢查和篩選，發(fā)現(xiàn)有些胚胎因?yàn)橥庠椿�因的插入而死亡，可能原因是：外源基因的插入�?dǎo)致胚胎發(fā)育所需的正�；�因不能表達(dá)。