Question

【題目】紫杉醇是目前最好的抗腫瘤藥物之一，但其藥源植物紅豆杉十分稀缺。大多數(shù)紅豆杉細胞培養(yǎng)物的紫杉醇產(chǎn)量較低，研究人員通過構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶(Bapt)基因的超表達載體來提高紫杉醇產(chǎn)量，其流程如下。

(1)過程①②使用的工具酶分別是_________和_________。

(2)p1303載體上有一種叫增強子的元件，結(jié)合題意推測增強子的作用是_________。除了與目的基因表達有關(guān)的功能元件之外，p1303載體上還應(yīng)有_________標記基因和_________。

(3)能否通過Bapt基因探針來檢測步驟⑤是否成功?為什么? _________。

(4)為檢驗最終的實驗?zāi)康氖欠襁_到，還應(yīng)檢測_________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶 Taq酶 促進Bapt基因的表達 潮霉素 復(fù)制原點 不能，因為紅豆杉細胞中本身存在Bapt基因，不管超表達載體是否成功導(dǎo)入，都能與Bapt基困探針形成雜交分子 紫杉醇的產(chǎn)量

【解析】

據(jù)圖①逆轉(zhuǎn)錄構(gòu)建紅豆杉的cDNA文庫；②PCR技術(shù)擴增Bzpt基因；③表達載體的構(gòu)建④將表達載體導(dǎo)入受體細胞；⑤用含有表達載體的農(nóng)桿菌感染受體紅豆杉細胞。

（1）①為逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；②為PCR擴增過程，該過程需要使用Taq酶。

（2）根據(jù)題干信息“研究人員通過構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶（Bapt）基因的超表達載體來提高紫杉醇產(chǎn)量”可知，p1303載體上增強子的作用是促進Bapt基因的表達�；�因表達載體的組成包括啟動子、終止子、標記基因、目的基因、復(fù)制原點等，由圖可知，標記基因是潮霉素抗性基因，因此除了與目的基因表達有關(guān)的功能元件（啟動子和終止子）之外，p1303載體上還應(yīng)有標記基因（潮霉素抗性基因）和復(fù)制原點。

（3）因為紅豆杉細胞中本身存在Bapt基因，不管超表達載體是否成功導(dǎo)入，都能與Bapt基因探針形成雜交分子，因此不能通過Bapt基因探針來檢測步驟⑤是否成功。

（4）根據(jù)題干信息“研究人員通過構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶（Bapt）基因的超表達載體來提高紫杉醇產(chǎn)量”可知，為檢驗最終的實驗?zāi)康氖欠襁_到，還應(yīng)檢測紫杉醇的產(chǎn)量。