Question

4．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag₂基因的表達(dá)載體．可以根據(jù)Rag₂基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點(diǎn)．
（4）為檢測(cè)Rag₂基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag₂蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的過(guò)程圖解，其中①表示核移植過(guò)程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．

解答 解：（1）核移植是指將體細(xì)胞核移植到去核卵母細(xì)胞中，因此①核移植過(guò)程中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（2）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)位于囊胚中，所以步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞．
（3）步驟③中，根據(jù)Rag₂基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物并擴(kuò)增Rag₂基因片段．基因工程中構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，若用HindIII和PstI限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段，則為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點(diǎn)．
（4）為檢測(cè)Rag₂基因的表達(dá)情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)（抗原），用抗Rag₂蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．
故答案為：
（1）細(xì)胞核  
（2）囊胚  
（3）核苷酸序列　HindⅢ和PstⅠ
（4）蛋白質(zhì)

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題；識(shí)記核移植的具體過(guò)程；識(shí)記體外受精的具體過(guò)程及早期胚胎發(fā)育的過(guò)程，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．