Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題；

（一）回答與香蕉酒制作有關(guān)的問(wèn)題；

（1）香蕉果肉含糖高，又有一定的酸度，適于作為果酒發(fā)酵的原料。但香蕉果漿的黏度大，需向香蕉果漿中添加果膠酶使果膠最終分解為__________________，使果漿中的固體與液體分離效果更好；然后進(jìn)行沸水浴處理，原因是__________________，然后對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行__________________，可見(jiàn)果汁的出汁率與澄清度大大提高。

（2）將獲得的果汁置于90℃環(huán)境中__________________處理15分鐘，以減少其他雜菌干擾。取出果汁后冷卻，再經(jīng)過(guò)糖酸調(diào)配、硫處理后，最后向果汁中添加__________________進(jìn)行果酒發(fā)酵。

（3）發(fā)酵后第15天，當(dāng)發(fā)酵瓶中__________________，即表示發(fā)酵完畢，可取10mL香蕉酒離心獲得__________________，利用__________________法測(cè)定香蕉酒的澄清度。

（二）回答與基因工程和單克隆抗體制備有關(guān)的問(wèn)題：

（1）單克隆抗體在病毒的鑒定上具有重要的作用。首先將特定抗原物多次對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射，取小鼠的骨髓瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入一定量的PEG或__________________作介導(dǎo)進(jìn)行融合。

（2）將融合好的細(xì)胞接種在__________________上，并置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，將培養(yǎng)液中的雜交細(xì)胞通過(guò)__________________篩選出陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，為獲得單一細(xì)胞群體和純凈均一的單克隆抗體，往往對(duì)陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行__________________。

（3）單克隆抗體還可通過(guò)單個(gè)B細(xì)胞抗體技術(shù)獲得。首先將分選到的單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行裂解，獲得特異性抗體的基因片段，利用__________________法對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，隨后構(gòu)建重組質(zhì)粒，并導(dǎo)入至細(xì)菌中大量復(fù)制，為了提高重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌的效率，需要考慮__________________（至少答出兩點(diǎn)）等因素。

（4）從細(xì)菌中提取擴(kuò)增后的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入至小鼠成纖維細(xì)胞內(nèi)表達(dá)抗體，37℃培養(yǎng)一段時(shí)間后，將培養(yǎng)液離心獲取抗體，并進(jìn)一步__________________、檢測(cè)便可獲得單克隆抗體。

Answer 1

【答案】半乳糖醛酸 沸水浴使纖維素等固形物凝聚 過(guò)濾 滅菌（殺菌） 酵母菌 停止出現(xiàn)氣泡 上清液 比濁/光電比色/比色 仙臺(tái)病毒 飼養(yǎng)層/滋養(yǎng)細(xì)胞 抗體檢驗(yàn) 細(xì)胞克隆/克隆培養(yǎng)法 PCR 導(dǎo)入方法、篩選條件、防止污染、重組DNA的質(zhì)量和濃度、試劑的質(zhì)量（氯化鈣的純度）、受體細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和密度 純化

【解析】

1、果膠酶不是特指一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，包括多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶。

2、參與果酒制作的微生物是酵母菌，其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。果酒制作的原理：

（1）在有氧條件下，1分子C6H12O6和6分子H2O和6分子O2在酶的作用下生成6分子CO2和12分子H2O，并放出大量的能量；

（2）在無(wú)氧條件下，1分子C6H12O6在酶的作用下生成2分子CO2和2分子C2H5OH，并放出少量的能量。

3、基因工程的操作步驟為：

第一步：目的基因的獲�。�

（1）目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因；

（2）原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法；

（3）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。

第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建：

（1）目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；

（2）組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。

第三步：將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：

（1）轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程；

（2）常用的轉(zhuǎn)化方法：

①將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等；

②將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)，此方法的受體細(xì)胞多是受精卵；

③將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞：Ca2+轉(zhuǎn)化法。

（3）重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后，篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。

第四步：目的基因的檢測(cè)和表達(dá)：

（1）首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)；

（2）其次還要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交；

（3）最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原--抗體雜交；

（4）有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定．如轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)植物是否出現(xiàn)抗蟲(chóng)性狀。

4、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（一）（1）香蕉果肉含糖高，又有一定的酸度，適于作為果酒發(fā)酵的原料。但香蕉果漿的黏度大，需向香蕉果漿中添加果膠酶使果膠最終分解為半乳糖醛酸，使果漿中的固體與液體分離效果更好；然后進(jìn)行沸水浴處理，原因是沸水浴使纖維素等固形物凝聚，然后對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行過(guò)濾，可見(jiàn)果汁的出汁率與澄清度大大提高。

（2）將獲得的果汁置于90℃環(huán)境中滅菌處理15分鐘，以減少其他雜菌干擾。取出果汁后冷卻，再經(jīng)過(guò)糖酸調(diào)配、硫處理后，最后向果汁中添加酵母菌進(jìn)行果酒發(fā)酵。

（3）發(fā)酵后第15天，當(dāng)發(fā)酵瓶中停止出現(xiàn)氣泡，即表示發(fā)酵完畢，可取10mL香蕉酒離心獲得上清液，利用比濁（或光電比色或比色）法測(cè)定香蕉酒的澄清度。

（二）（1）單克隆抗體在病毒的鑒定上具有重要的作用。首先將特定抗原物多次對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射，取小鼠的骨髓瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞按一定比例混合，并加入一定量的PEG或滅活病毒作介導(dǎo)進(jìn)行融合。

（2）將融合好的細(xì)胞接種在飼養(yǎng)層或滋養(yǎng)細(xì)胞上，并置于CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，將培養(yǎng)液中的雜交細(xì)胞通過(guò)抗體檢驗(yàn)篩選出陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，為獲得單一細(xì)胞群體和純凈均一的單克隆抗體，往往對(duì)陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞克�。ɑ蚩寺∨囵B(yǎng)法）。

（3）單克隆抗體還可通過(guò)單個(gè)B細(xì)胞抗體技術(shù)獲得。首先將分選到的單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行裂解，獲得特異性抗體的基因片段，利用PCR法對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，隨后構(gòu)建重組質(zhì)粒，并導(dǎo)入至細(xì)菌中大量復(fù)制，為了提高重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌的效率，需要考慮導(dǎo)入方法、篩選條件、防止污染、重組DNA的質(zhì)量和濃度、試劑的質(zhì)量（氯化鈣的純度）、受體細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和密度等因素。

（4）從細(xì)菌中提取擴(kuò)增后的重組質(zhì)粒，導(dǎo)入至小鼠成纖維細(xì)胞內(nèi)表達(dá)抗體，37℃培養(yǎng)一段時(shí)間后，將培養(yǎng)液離心獲取抗體，并進(jìn)一步純化、檢測(cè)便可獲得單克隆抗體。