Question

【題目】某興趣小組對受污染的河流水體進(jìn)行了大腸桿菌數(shù)目的測定。請回答問題：

（1）測定大腸桿菌活菌數(shù)目時(shí)，需制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中為細(xì)菌提供氮源的物質(zhì)是______________。培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右才能用來倒平板，你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？_____________。等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置的原因是____________________。為了鑒別大腸桿菌菌落，可向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍(lán)作為指示劑，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)__________。

（2）為了便于統(tǒng)計(jì)污染嚴(yán)重的水體中活菌的數(shù)目，需將水樣進(jìn)行適當(dāng)稀釋，例如取水樣2mL，加入無菌水________mL制備稀釋倍數(shù)為101的稀釋液，并照此依次制備更高倍數(shù)的稀釋液。每個(gè)稀釋倍數(shù)的菌液取10mL進(jìn)行過濾，然后將濾膜放置在培養(yǎng)基上。為了防止雜菌污染，稀釋、過濾和旋轉(zhuǎn)濾膜等操作都應(yīng)該在__________進(jìn)行。

（3）將放有濾膜的平板置于適宜條件下培養(yǎng)，每隔12h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，應(yīng)選取菌落數(shù)目____________時(shí)的記錄作為結(jié)果。如果經(jīng)過培養(yǎng)后稀釋倍數(shù)為102的4個(gè)平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48，那么每升河水中約含大腸桿菌_______個(gè)。用這種方法測定的菌落數(shù)量往往比實(shí)際活菌數(shù)量更_______，這是因?yàn)?/span>_____________。

（4）除了上述活菌計(jì)數(shù)法外，顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測定細(xì)菌數(shù)量的常用方法。利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板（2mm×2mm）、滴管、試管、顯微鏡等儀器進(jìn)行研究，從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，應(yīng)將_________________；采用抽樣檢測的方法，先_______________計(jì)數(shù)室上，再_______________________，讓培養(yǎng)液自行滲入計(jì)數(shù)室（厚度為0.1mm）；需稍等片刻，待____________________時(shí)，再將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板放在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)。已知計(jì)數(shù)板每小格為0.1mm×0.1mm，經(jīng)隨機(jī)檢測，五個(gè)小方格內(nèi)細(xì)菌平均數(shù)為8.2個(gè)，則細(xì)菌密度_________個(gè)/L。

Answer 1

【答案】 牛肉膏和蛋白胨 手背觸摸不燙手 防皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā) 黑色 18 酒精燈火焰附近 穩(wěn)定 4.5×105 少 當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落 試管輕輕振蕩幾次 將蓋玻片放在 將吸取的培養(yǎng)液滴于蓋玻片邊緣 細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部 8.2×109

【解析】試題分析：本題主要考查牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的制備，制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟是：計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板。對大腸桿菌用稀釋平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，再利用計(jì)算公式：1毫升（克）樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M，算出大腸桿菌的個(gè)數(shù)。

（1）用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，培養(yǎng)基中的牛肉膏和蛋白胨能為細(xì)菌提供氮源。需要用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶剛剛不燙手，此時(shí)培養(yǎng)基已冷卻到50℃左右，可以進(jìn)行倒平板操作。等待平板冷卻凝固后需要倒置，防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。在添加有伊紅美藍(lán)的培養(yǎng)基中，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)深黑色。

（2）用稀釋涂布平板法進(jìn)行對微生物計(jì)數(shù)時(shí)，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品大約含有多少活菌，若將水樣稀釋102倍，可取水樣1mL加入到99mL的無菌水中進(jìn)行稀釋；為了防止雜菌污染，整個(gè)操作過程應(yīng)進(jìn)行無菌操作，所以在稀釋、過濾和旋轉(zhuǎn)濾膜等操作時(shí)都應(yīng)該在酒精燈火焰附近進(jìn)行。（3）統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)的菌落數(shù)目時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，如果經(jīng)過培養(yǎng)后稀釋倍數(shù)為102的4個(gè)平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48，則平板上平均菌落數(shù)=（43+47+42+48）÷4=45個(gè)，每毫河水中約含大腸桿菌數(shù)=（C÷V）×M=（45÷0.1）×102=4.5×104個(gè)，每升河水中約含大腸桿菌數(shù)=4.5×104×103=4.5×107個(gè)；用稀釋涂布平板法測定的細(xì)菌數(shù)量比實(shí)際活菌數(shù)量要少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落。

（4）從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，應(yīng)將試管輕輕振蕩幾次，采用抽樣檢測的方法，先將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，再將吸取的培養(yǎng)液滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行滲入計(jì)數(shù)室，需稍等片刻，待細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部時(shí)，再將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板放在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)。細(xì)菌密度=8.2×100×104×103=8.2×109個(gè)。