Question

【題目】“生物導(dǎo)彈”可用于殺死人類某些癌細(xì)胞，制備“生物導(dǎo)彈”是單克隆抗體的重要應(yīng)用之一，其過(guò)程如下圖所示。請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）在①-⑤批量生產(chǎn)A蛋白抗原的過(guò)程中，要快速獲得大量的A基因可采用_____技術(shù)。 在該技術(shù)中，解旋的方法是_______。

（2）在⑥-⑨批量生產(chǎn)“生物導(dǎo)彈”的過(guò)程中，⑦過(guò)程所用的“脾臟中的細(xì)胞”為_______，⑦過(guò)程區(qū)別于植物體細(xì)胞雜交技術(shù)所特有的誘導(dǎo)因素是_______，要得到所需的雜交瘤細(xì)胞一般要經(jīng)過(guò)_____個(gè)階段篩選。

（3）培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液通常需要加入血清的作用是_______。

（4）步驟⑧獲得的單克隆抗體最終可以從_____（①小鼠腹水、②培養(yǎng)液）提取，抗體的靶向作用是利用了其_____的特點(diǎn)。

（5）單克隆抗體通過(guò)上圖所示的基因工程來(lái)制備，此技術(shù)的核心步驟是_______。

Answer 1

【答案】PCR 適當(dāng)?shù)母邷靥幚?/span> B淋巴細(xì)胞（或漿細(xì)胞） 滅活的病毒處理 2 血清中還包含了一些動(dòng)物的激素和酶等未知成分，可以促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育 ①、② 特異性 基因表達(dá)載體的構(gòu)建

【解析】

1、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應(yīng)，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞；誘導(dǎo)B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行抗體檢測(cè)，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞；進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)或注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。
2、圖中①②③為基因工程，④為早期胚胎培養(yǎng)，⑤⑥提取A蛋白，注入到小鼠體內(nèi)獲取產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，⑦是細(xì)胞融合，⑧是篩選能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，制備單克隆抗體，進(jìn)而制備生物導(dǎo)彈。

（1）為了快速的獲得A基因，可利用PCR技術(shù)在體外對(duì)DNA進(jìn)行復(fù)制，PCR是利用高溫（90℃-95℃）解開(kāi)雙鏈DNA。故在該技術(shù)中，解旋的方法是適當(dāng)?shù)母邷靥幚怼?/span>

（2）過(guò)程⑦表示將受抗原刺激的B淋巴細(xì)胞（或漿細(xì)胞）和骨髓瘤細(xì)胞融合的過(guò)程，故⑦過(guò)程所用的“脾臟中的細(xì)胞”為B淋巴細(xì)胞（或漿細(xì)胞）；⑦過(guò)程區(qū)別于植物體細(xì)胞雜交技術(shù)所特有的誘導(dǎo)因素是用滅活的病毒處理；經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)融合后可得到3種融合的細(xì)胞和未融合的細(xì)胞，經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)基的篩選可得到雜交瘤細(xì)胞，再經(jīng)過(guò)單一抗體陽(yáng)性檢測(cè)篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，即該過(guò)程需要經(jīng)過(guò)兩個(gè)階段的篩選。

（3）由于血清中包含了一些動(dòng)物的激素和酶等未知成分，可以促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育，故培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液通常還需要加入血清。

（4）雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)，可用培養(yǎng)基培養(yǎng)或注入小鼠腹腔中培養(yǎng)，最后可從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。故步驟⑧獲得的單克隆抗體最終可以從①、②中提取�？贵w與抗原可發(fā)生特異性結(jié)合，故抗體的靶向作用是利用了其特異性的特點(diǎn)。

（5）單克隆抗體還可通過(guò)基因工程來(lái)制備，此技術(shù)的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，所用的工具酶是限制酶和DNA連接酶。