Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖（圖中數(shù)字序號(hào)表示的是相關(guān)過(guò)程）。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：

（1）過(guò)程②利用的技術(shù)是______________，過(guò)程③中涉及到了基因工程技術(shù)，其中作為受體細(xì)胞的是____________。

（2）過(guò)程③中獲取的目的基因是_______________，可以根據(jù)該基因的___________________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因片段。按此方法和圖示技術(shù)流程，完成基Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的酶有____________和耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)等。

（3）圖中造血干細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)至少有___________個(gè)來(lái)源。為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用____________進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。圖中所述克隆技術(shù)屬于___________克隆。

Answer 1

【答案】 早期胚胎培養(yǎng) ES細(xì)胞 (正常的）Rag2基因 脫氧核苷酸序列(或堿基對(duì)序列或遺傳信息） 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和胰蛋白酶 三 抗Rag2蛋白的抗體 治療性(或體細(xì)胞核移植等）

【解析】分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的過(guò)程圖解，其中①表示核移植過(guò)程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。

（1）結(jié)合前面的分析可知，過(guò)程②利用的技術(shù)是早期胚胎培養(yǎng)，過(guò)程③中涉及到了基因工程技術(shù)，其中作為受體細(xì)胞的是ES細(xì)胞。

（2）圖示利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，可推知過(guò)程③中獲取的目的基因是（正常的）Rag2基因。步驟③中，在構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體時(shí)，可以根據(jù)Rag2基因的脫氧核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。分離、培養(yǎng)ES細(xì)胞過(guò)程中需要用胰蛋白酶分散細(xì)胞。PCR技術(shù)擴(kuò)增過(guò)程中用耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶），基因?qū)�入過(guò)程中需要用限制性酶核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶。

（3）圖中造血干細(xì)胞中的遺傳物質(zhì)至少有3個(gè)來(lái)源：上皮細(xì)胞的核基因、卵母細(xì)胞的質(zhì)基因和Rag2基因。為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)（抗原），用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。根據(jù)圖形分析可知：基因?qū)�入在體外進(jìn)行的，因此，該治療方式屬于體外基因治療，圖中所述克隆技術(shù)也屬于治療性克隆。