Question

10．家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力．將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥．
（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細(xì)胞．
（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入載體質(zhì)粒的啟動子和終止子之間．
（3）采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞．改PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、引物 和TaqDNA聚合酶．
（4）將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最常用的方法是顯微注射．此方法的受體細(xì)胞多是受精卵（卵母細(xì)胞）．
（5）將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)時需要提供氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．
O₂是細(xì)胞代謝所必需的，CO₂的主要作用維持培養(yǎng)液的pH；培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理．通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的雜菌污染．此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲�。虎诨�因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測與表達(dá)．從分子水平上檢測目的基因的方法：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
2、PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）等．

解答 解：（1）動物細(xì)胞培養(yǎng)時，需要用胰蛋白酶處理動物組織，以便獲得單個細(xì)胞．
（2）基因表達(dá)載體包括啟動子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因，其中啟動子位于目的基因的首端，啟動基因的轉(zhuǎn)錄，終止子位于目的基因的尾端，終止基因的轉(zhuǎn)錄，因此需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入載體質(zhì)粒的啟動子和 終止子之間．
（3）采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增目的基因時，其體系主要包括：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、耐高溫的DNA聚合酶（taq酶）和DNA引物．
（4）動物細(xì)胞工程中，由于受精卵具有全能性，一般選用受精卵作為受體細(xì)胞，將目的基因?qū)�入受精卵最常用的方法是顯微注射．
（5）將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)時需要提供氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．
O₂是細(xì)胞代謝所必需的，CO₂的主要作用維持培養(yǎng)液的pH；培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理．通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的雜菌污染．此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細(xì)胞自身造成危害．
故答案為：
（1）胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）
（2）終止子
（3）TaqDNA聚合酶
（4）顯微注射       受精卵（卵母細(xì)胞）
（5）細(xì)胞代謝      維持培養(yǎng)液的pH     抗生素

點(diǎn)評 本題綜合考查基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)等知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟；識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的具體過程和條件，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．