Question

【題目】轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是將從蘇云金芽孢桿菌中分離出來的Bt毒蛋白基因轉(zhuǎn)入植物細(xì)胞培育獲得，回答下列相關(guān)問題。

（1）從蘇云金芽孢杄菌獲得Bt毒蛋白基因后，可通過PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，該過程需要有________作為引物，該技術(shù)中所用的酶是________。

（2）將Bt毒蛋白基因?qū)�入植物�?xì)胞常用________法，該方法中需將Bt基因插入到Ti質(zhì)粒的________上，其原因是________________________。

（3）檢測Bt毒蛋白基因是否導(dǎo)入植物細(xì)胞，可以用________________________________作為探針進(jìn)行檢測，導(dǎo)入成功的標(biāo)志是________________________________。將含有Bt毒蛋白基因的植物細(xì)胞培育成抗蟲植株需通過________技術(shù)。

Answer 1

【答案】一段已知Bt毒蛋白基因的核苷酸序列 Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶） 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化 T-DNA T-DNA可攜帶目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上 放射性同位素標(biāo)記的Bt毒蛋白基因的一條鏈 顯示出雜交帶 植物組織培養(yǎng)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）PCR技術(shù)中所用的酶為耐高溫的熱穩(wěn)定DNA聚合酶，即Taq酶，PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因首先要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。

（2）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，該方法中，需將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，利用T-DNA的轉(zhuǎn)移作用，將目的基因攜帶進(jìn)入受體細(xì)胞，并將目的基因整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。

（3）檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，用DNA分子雜交技術(shù)，該方法需用放射性同位素標(biāo)記的Bt毒蛋白基因的一條鏈作為探針，若顯示雜交帶，則說明受體細(xì)胞中含有目的基因，導(dǎo)入成功。將含有目的基因的植物細(xì)胞培育成轉(zhuǎn)基因植株需通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)。