Question

目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

(1)構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因，以便于________。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù)________鍵，成功地獲得了重組質(zhì)粒。說明____________________________________________________。

(4)為了檢測上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無ampR和tetR的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是____________，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是________________。

 

Answer 1

(1)篩選(鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞)

(2)

(3)磷酸二酯　兩種限制酶(BamHⅠ和BglⅡ)切割得到的黏性末端相同

(4)能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素　pBR322 質(zhì)粒

【解析】

試題分析：

（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時要有抗性基因作為標(biāo)記基因，以便于鑒別目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；

（2）

（3）DNA連接酶作用是恢復(fù)磷酸二酯鍵；通過題干敘述知，兩種限制酶(BamHⅠ和BglⅡ)切割得到的黏性末端相同，這樣才能進(jìn)行相應(yīng)的堿基互補配對；

（4）與圖三空圈相對應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素；圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的能抗抗氨芐青霉素的人工質(zhì)粒即pBR322 質(zhì)粒。

考點：本題考查基因工程的內(nèi)容，意在考查考生對所學(xué)知識的理解并把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系以及分析圖解的能力。