Question

【題目】華蟾素是我國經(jīng)典抗腫瘤藥物。研究人員為探尋華蟾素注射液抗肝癌細(xì)胞的作用機(jī)理，進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)。請根據(jù)圖中信息回答下列問題。

Ⅰ.肝癌細(xì)胞的培養(yǎng)

（1）培養(yǎng)肝癌細(xì)胞時，在培養(yǎng)基中加入適量的___________以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，為防止培養(yǎng)過程發(fā)生污染要加入___________。此外，每48h更換1次培養(yǎng)液，目的是___________；同時還要提供適宜的溫度、___________、氧氣和二氧化碳等環(huán)境條件。

Ⅱ.探究華蟾素藥效作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)：

（2）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（簡稱TopoⅡ）為真核生物所必需，在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等方面發(fā)揮重要作用，TopoⅡ在腫瘤細(xì)胞中含量明顯高于正常細(xì)胞。華蟾素注射液處理細(xì)胞48h后，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測TopoⅡ基因的表達(dá)情況，結(jié)果如表。

華蟾素濃度（μg/ml）	0	0.105	0.21	0.42
TopoⅡ基因表達(dá)量	+++++	++++	++	+

①逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)的主要原理是：提取肝癌細(xì)胞中的總RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，為完成該反應(yīng)還需要添加______________________________________。

②由上可知，華蟾素注射液在分子水平上影響肝癌細(xì)胞的機(jī)理是_______________________________。

Answer 1

【答案】 血清（血漿） 抗生素 防止代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害 pH 逆轉(zhuǎn)錄 引物、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）和四種脫氧核苷酸 抑制TopoⅡ基因的轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致TopoⅡ含量降低

【解析】試題分析：分析表中結(jié)果可知，隨著華蟾素注射液濃度的增加，TopoⅡ基因表達(dá)量減少，再結(jié)合題干信息“DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄等方面發(fā)揮重要作用，且它在腫瘤細(xì)胞中含量明顯高于正常細(xì)胞”分析，華蟾素注射液可能的作用機(jī)理是抑制TopoⅡ基因轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致TopoⅡ含量降低。

（1）在動物細(xì)胞培養(yǎng)時，所需的營養(yǎng)物質(zhì)有糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽、微量元素等，將這些物質(zhì)按其類別和所需的數(shù)量嚴(yán)格配制而成的培養(yǎng)基，成為合成培養(yǎng)基。由于人們對細(xì)胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)還沒有完全搞清楚，因此，在使用合成培養(yǎng)基時，通常需要加入血清、血漿等一些天然成分；為防止培養(yǎng)過程發(fā)生污染需要在培養(yǎng)基加入抗生素；為了防止代謝物積累對細(xì)胞自身造成危害，還要定時更換培養(yǎng)液；同時還要提供適宜的溫度、PH、氧氣和二氧化碳等環(huán)境條件。

（2）①逆轉(zhuǎn)錄需要以提取的mRNA為模板，以游離的脫氧核苷酸為原料，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成cDNA片段。進(jìn)行PCR擴(kuò)增技術(shù)需要準(zhǔn)備四類物質(zhì)條件：模板（cDNA）、原料（四種脫氧核苷酸），引物和Taq酶。②由表中實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，華蟾素注射液在分子水平上影響肝癌細(xì)胞的機(jī)理是抑制TopoⅡ基因的轉(zhuǎn)錄，最終導(dǎo)致TopoⅡ含量降低。