Question

【題目】在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長。下圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程。請據(jù)圖回答：

（1）A過程需要的酶有：_______________________________________。

（2）將目的基因?qū)�入植物體細(xì)胞除了上述農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可用________ ____ 法（任填一種）；可用__________ __ _技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基抗蟲棉是否成功表達(dá)出Bt毒蛋白；除抗蟲基因外，基因表達(dá)載體中還必須包含的部分是__________________________ （至少寫出兩點(diǎn)）。

（3）B選擇培養(yǎng)過程的培養(yǎng)基除含有必要營養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂和激素外，還必須加入_____________。

（4）由外植體培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株的D、E過程分別為_______________，該過程的理論基礎(chǔ)是_______________ ___。

Answer 1

【答案】（1）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶。

（2）基因槍法（花粉管通道法） ； 抗原—抗體雜交；

啟動子、終止子、標(biāo)記基因。

（3）卡那霉素 （4）脫分化、再分化； 細(xì)胞的全能性

【解析】（1）圖中A過程表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，該過程需要的酶有限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶。

（2）將目的基因?qū)�入植物體細(xì)胞常用的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；可用抗原—抗體雜交法檢測目的基因是否成功表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)；本題中的抗蟲基因?yàn)槟康幕�因，基因表達(dá)載體中除了目的基因外，還必須包含啟動子、終止子、標(biāo)記基因等。

（3）根據(jù)題意可知，重組質(zhì)粒上的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因（kan）。由于只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長，所以可用含卡那霉素的培養(yǎng)基對土壤農(nóng)桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，從而篩選出含重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌。

（4）由外植體培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株是通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)完成的，所以圖中的D、E過程分別為脫分化和再分化；該過程的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞的全能性。