Question

2．請選出下列正確的操作步驟（　�。�
①土壤取樣                ②稱取10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中
③吸取0.1mL進行平板涂布    ④依次稀釋至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷稀釋度．

• A． ①②③④
• B． ①③②④
• C． ①②④③
• D． ①④②③

Answer 1

分析 分離分解尿素的細菌的過程是：1．土壤取樣
從肥沃、濕潤的土壤中取樣．先鏟去表層土3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中．
2．制備培養(yǎng)基
準備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基將菌液稀釋相同的倍數，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用．由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數為10³～10⁷．每個稀釋度下需要3個選擇培養(yǎng)基，1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此共需要15個選擇培養(yǎng)基，5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基．此外，還需要準備8個滅菌的試管和1個滅菌的移液管．
3．微生物的培養(yǎng)與觀察
將10 g土樣加入盛有90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中（錐形瓶體積為250 mL），充分搖勻，吸取上清液1 mL，轉移至盛有9 mL的生理鹽水的無菌大試管中，依次等比稀釋至10⁷稀釋度，并按照由10⁷～10³稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進行平板涂布操作．按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管．
將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃溫度下培養(yǎng)．隨著培養(yǎng)時間的延長，會有不同的菌落產生．比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數量、形態(tài)等，并做好記錄．
挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產生顏色反應．
4．細菌的計數
當菌落數目穩(wěn)定時，選取菌落數在30～300的平板進行計數．在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數，然后求出平均值，并根據平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數目

解答 解：分離分解尿素的細菌的過程是：①土壤取樣→②稱取10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中→④依次稀釋至10¹、10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷稀釋度→③吸取0.1mL進行平板涂布．C正確．
故答案為：C．

點評 本題主要考查微生物的分和培養(yǎng)，意在強化學生對細菌的培養(yǎng)條件和分離過程的識記與理解．