Question

【題目】為了增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，一起導(dǎo)入油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種。

（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用__________法快速擴(kuò)增從陸地棉基因文庫(kù)中獲取到的酶D基因和從擬南芥基因文庫(kù)中獲取到的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因。所含三種限制酶（ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ）的切點(diǎn)如圖所示，則用______酶處理兩個(gè)基因后，可得到______端（填圖中字母）相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入如圖所示Ti質(zhì)粒的T—DNA中，構(gòu)建_________并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含__________的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是____________，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，該細(xì)胞通過(guò)__________技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。

（4）用________法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)。

Answer 1

【答案】 PCR ClaⅠ和DNA連接 A和 D 基因表達(dá)載體（或“重組質(zhì)粒”） 四環(huán)素 利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞 植物組織培養(yǎng) 抗原-抗體雜交

【解析】試題分析：基因文庫(kù)包括cDNA文庫(kù)、基因組文庫(kù)等，某個(gè)群體包含一種生物所有的基因的文庫(kù)叫基因組文庫(kù)，而用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段屬于cDNA文庫(kù)。限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi)，因此具有專(zhuān)一性。同種限制酶切割能夠產(chǎn)生相同的黏性末端，便于質(zhì)粒和目的基因連接。

（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因。在上述引物設(shè)計(jì)時(shí)，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識(shí)別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個(gè)基因后，得到A、D端相連的融合基因。

（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中。將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液。

（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞，該細(xì)胞通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株。

（4）用抗原-抗體雜交法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)。