Question

科學家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstI、SmaI、HindⅢ、AluI等四種限制酶切割位點。下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖(ampr為抗氨芐青霉素基因)，其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，I、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細胞。請據(jù)圖作答：

（1）基因工程的核心步驟是___________，在該步驟中，可用一種或多種限制 酶進行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應該選用限制酶 ___________，分別對________________進行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為______種和________種。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細胞的生長，欲利用該培養(yǎng)基篩選已導入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞，應使基因表達載體I中含有________ ，作為標記基因。除上述目的基因和標記基因外，基因表達載體I中還應有 ___________、 ___________和復制原點。

（3）研究人員通常采用________ 法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄細胞�?nèi)。通常采用________技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應的蛋白質(zhì)。

Answer 1

（1）構(gòu)建基因表達載體   PstI、SmaI    含魚抗凍蛋白基因的DNA和質(zhì)粒    

4    2 

（2）抗氨芐青霉素基因(ampr)    啟動子    終止子

(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化(或基因槍法等，答案合理即給分)     抗原--抗體雜交