Question

【題目】農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的一種技術(shù)方法。：科研人員從某種荒漠植物細(xì)胞中提取抗旱基因，擬用來改良作物抗旱能力，從而利用大面積荒地以提高農(nóng)業(yè)發(fā)展。請(qǐng)回答下列問題：

（1）單子葉植物中常用____________法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，不用農(nóng)桿菌的原因是__________。

（2）抗旱基因若是從____________（填“基因組文庫”或“CDNA文庫”）中獲取，則不能用PCR技術(shù)擴(kuò)增，是因?yàn)槔��?/span>PCR技術(shù)的前提是要有________________________。

（3）用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法改良作物時(shí)，先將抗旱基因和農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒連接構(gòu)建表達(dá)載體，再將重組載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中，該過程__________________（填“是”或“不是”）轉(zhuǎn)化，理由是____________。

（4）科研人員將長勢一致的轉(zhuǎn)入抗旱基因的作物（實(shí)驗(yàn)組）和非轉(zhuǎn)入抗旱基因的作物（對(duì)照組）進(jìn)行____________處理，如果____________，則獲得了抗旱作物。

Answer 1

【答案】基因槍 自然條件下農(nóng)桿菌對(duì)單子葉植物沒有感染能力 基因組文庫 己知抗旱基因核苷酸序列合成的引物 不是 轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)并表達(dá)的過程，農(nóng)桿菌不是受體細(xì)胞 干旱 實(shí)驗(yàn)組抗旱能力明顯高于對(duì)照組

【解析】

1、基因工程的操作工具包括限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體，工具酶包括限制酶和DNA連接酶。

2、目的基因獲取的方法：從基因文庫中獲取、PCR技術(shù)擴(kuò)增、人工合成。

3、目的基因的檢測和表達(dá)

首先要檢測：轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子雜交技術(shù)。

其次還要檢測：目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與 mRNA雜交。

最后檢測：目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取 蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的 抗體進(jìn)行抗原——抗體雜交。

有時(shí)還需進(jìn)行：個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。

（1）在自然條件下，農(nóng)桿菌感染雙子葉植物和裸子植物，因此農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法是將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞最常用的方法，但農(nóng)桿菌對(duì)單子葉植物沒有感染能力，因此單子葉植物中常用基因搶法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。

（2）基因組文庫是利用限制酶直接切割的基因，序列未知，cDNA文庫是利用反轉(zhuǎn)錄合成的基因，序列己知，就可以根據(jù)己知抗旱基因核苷酸序列合成引物。

（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程，稱為轉(zhuǎn)化。此過程只是將重組質(zhì)粒載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌，沒有導(dǎo)入真正的受體植物細(xì)胞，所以不是轉(zhuǎn)化。

（4）對(duì)轉(zhuǎn)基因抗旱植物進(jìn)行個(gè)體鑒定，需要干旱處理，比較導(dǎo)入抗旱基因與普通植物的抗旱性，若實(shí)驗(yàn)組抗旱能力比對(duì)照組明顯，則導(dǎo)入的基因表達(dá)成功。