Question

17．在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究上，常常需要進(jìn)行微生物的培養(yǎng)和計數(shù)．
（1）如圖是利用平板劃線法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面．

（2）分析下面培養(yǎng)基的配方：NaNO₃、KH₂PO₄、NaH₂PO₄、MgSO₄•7H₂O、KCl、H₂O．若此培養(yǎng)基用于培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，除應(yīng)除去上述成分中的NaNO₃外，還需加入尿素和葡萄糖物質(zhì)，以補充氮、碳源．
（3）應(yīng)用稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)的結(jié)果通常比實際結(jié)果小的原因是不同活菌形成的菌落相互重疊，若在稀釋倍數(shù)為10⁶的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為233，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是（涂布 平板時所用稀釋液的體積為0.2mL）1.165×10⁹．
（4）某同學(xué)在測定大腸桿菌的密度時發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，能否肯定該大腸桿菌的品系被污染了？不能，為什么？因為不能排除雜菌來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過程．

Answer 1

分析 1．分離菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的篩選
①依據(jù)：根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找．
②實例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的．
（2）實驗室中目的菌株的篩選
①原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度．pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長．
培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌．
2．統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
（1）稀釋涂布平板法（間接）
①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．
②通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中大約含有的活菌數(shù)．
（2）利用顯微鏡直接計數(shù)
3．分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．
4．實驗流程：土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長的菌落→鑒定

解答 解：（1）接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，圖中采取的是平板劃線法；該方法能把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面．
（2）培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌，其氮源是尿素，所以培養(yǎng)基中要除去含氮物質(zhì)，即去除NaNO₃，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源．
（3）由于兩個或多個細(xì)菌連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落，因此應(yīng)用稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)的結(jié)果通常比實際結(jié)果小；根據(jù)題意可知，每克樣品中的菌落數(shù)=平板上菌落數(shù)的平均值÷體積×稀釋倍數(shù)=233÷0.2×10⁶=1.165×10⁹．
（4）某同學(xué)在測定大腸桿菌的密度時發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基上還有其他雜菌的菌落，由于不能排除雜菌來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過程，因此不能肯定該大腸桿菌的品系被污染了．
故答案為：
（1）平板劃線   稀釋
（2）尿素和葡萄糖    氮、碳
（3）不同活菌形成的菌落相互重疊    1.1 65×10⁹
（4）不能      因為不能排除雜菌來自培養(yǎng)基或來自培養(yǎng)過程

點評 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)、測定某種微生物的數(shù)量等知識，要求考生識記培養(yǎng)基的成分和微生物的接種方法，并能準(zhǔn)確判斷圖中的接種方法；能采用稀釋涂布平板法對微生物進(jìn)行計數(shù)，并能對實驗結(jié)果進(jìn)行分析和簡單的計算．