Question

15．以小鼠為對(duì)象進(jìn)行下列各項(xiàng)研究工作，請(qǐng)分析回答問題．
（1）在小鼠體細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長時(shí)會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象而停止分裂增殖，此時(shí)瓶壁上形成細(xì)胞層數(shù)是單層（或一層）．
（2）體外受精之后，精核與卵核融合之前，用微型吸管除去雄核，再用細(xì)胞松弛素B處理（作用類似于用秋水仙素處理植物細(xì)胞），處理后的受精卵可發(fā)育成小鼠．這種方法在動(dòng)物新品種選育中的顯著優(yōu)點(diǎn)是縮短獲得純合體的時(shí)間．
（3）培育轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，通常以受精卵作受體細(xì)胞，為使外源基因在后代中長期保持，可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞的細(xì)胞核轉(zhuǎn)入去核卵母細(xì)胞中構(gòu)成重組細(xì)胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個(gè)體．
（4）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中添加抗生素來防治污染；若保存細(xì)胞，通常在液氮（或冷凍）條件下，因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中酶的活性降低，細(xì)胞代謝速率降低．
（5）單克隆抗體的制備中，首先需向小鼠注射相應(yīng)的抗原，以產(chǎn)生相應(yīng)的效應(yīng)B細(xì)胞，讓該細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合后經(jīng)選擇培養(yǎng)得到的雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選可獲得雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔，從腹水中獲得特異抗體，這種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能產(chǎn)生特異性抗體又能無限增殖．

Answer 1

分析 1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動(dòng)物組織塊（動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、細(xì)胞貼壁和接觸抑制：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁．細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互抑制時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制．
3、體外受精主要包括：卵母細(xì)胞的采集和培養(yǎng)、精子的采集和獲能、受精．動(dòng)物核移植是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體，核移植得到的動(dòng)物稱克隆動(dòng)物．
4、單克隆抗體的制備流程：人工誘導(dǎo)經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，再經(jīng)篩選獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞，通過培養(yǎng)獲得的雜交瘤細(xì)胞得到單克隆抗體．

解答 解：（1）在小鼠體細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長時(shí)會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象而停止分裂增殖，此時(shí)瓶壁上形成細(xì)胞層數(shù)是單層（或一層）．
（2）處理后的受精卵由于只有雌核，而細(xì)胞松弛素B處理作用類似于用秋水仙素處理植物細(xì)胞，所以處理后的受精卵染色體數(shù)目將加倍，這種方法在動(dòng)物新品種選育中的顯著優(yōu)點(diǎn)是容易獲得純合子并縮短育種時(shí)間（同植物的單倍體育種）．
（3）培育轉(zhuǎn)基因小鼠時(shí)，通常以受精卵作受體細(xì)胞，為使外源基因在后代中長期保持，可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞的細(xì)胞核轉(zhuǎn)入去核卵母細(xì)胞中構(gòu)成重組細(xì)胞，使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個(gè)體．
（4）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中添加抗生素來防治污染；若保存細(xì)胞，通常在液氮（或冷凍）條件下，因?yàn)樵谶@種條件下，細(xì)胞中酶的活性降低，細(xì)胞代謝速率降低．
（3）單克隆抗體的制備中，首先需向小鼠注射相應(yīng)的抗原，以產(chǎn)生相應(yīng)的效應(yīng)B細(xì)胞，讓該細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合后經(jīng)選擇培養(yǎng)得到的雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選可獲得雜交瘤細(xì)胞，將產(chǎn)生特異抗體的雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠腹腔，從腹水中獲得特異抗體，雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)是：既能產(chǎn)生特異性抗體又能無限增殖
故答案為：
（1）接觸抑制   單層（或一層）     
（2）縮短獲得純合體的時(shí)間
（3）受精卵    細(xì)胞核   去核卵母   
（4）抗生素       酶
（5）相應(yīng)的抗原     克隆化培養(yǎng)    抗體檢測       雜交瘤細(xì)胞    既能產(chǎn)生特異性抗體又能無限增殖

點(diǎn)評(píng) 本題綜合考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植和單克隆抗體的相關(guān)知識(shí)，重點(diǎn)考查動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)內(nèi)容，要求考生識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程、條件和應(yīng)用等知識(shí)，能靈活的運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)解答問題．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂．