Question

【題目】某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam_HI三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過(guò)程如圖所示，請(qǐng)回答下列問(wèn)題．
（1）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用和兩種限制酶對(duì)進(jìn)行切割，然后進(jìn)行連接，以保證重組DNA序列的唯一性．
（2）為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加 ， 理由是 ．
（3）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用技術(shù)，即通過(guò)和兩個(gè)主要過(guò)程最終形成完整植株．

Answer 1

【答案】
（1）SalⅠ； HindⅢ；質(zhì)粒和抗鹽基因的DNA
（2）氨芐青霉素；重組質(zhì)粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環(huán)素基因被破壞
（3）植物組織培養(yǎng)；脫分化；再分化
【解析】解：（1）質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點(diǎn)，其中BamHI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會(huì)破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會(huì)導(dǎo)致目的基因與運(yùn)載體反向連接；因此在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalI和HindIII兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒和抗鹽基因進(jìn)行切割，然后進(jìn)行連接，以保證重組DNA序列的唯一性．（2）選用SalI、HindIII兩種酶對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行切割時(shí)，形成的重組質(zhì)粒中含抗氨芐青霉基因而抗四環(huán)素基因被破壞，為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入氨芐青霉素．（3）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，即通過(guò) 脫分化和再分化 兩個(gè)主要過(guò)程最終形成完整植株．

所以答案是：（1）SalⅠHindⅢ質(zhì)粒和抗鹽基因的DNA （2）氨芐青霉素 重組質(zhì)粒中含抗氨芐青霉素基因而抗四環(huán)素基因被破壞（3）植物組織培養(yǎng) 脫分化 再分化

【考點(diǎn)精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能正確解答此題．