Question

【題目】哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞,在生命科學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：

（1）從哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中提取血紅蛋白時(shí),首先要用相當(dāng)于紅細(xì)胞液體體積五倍的__________洗滌紅細(xì)胞，直至__________________，表明紅細(xì)胞已經(jīng)洗滌干凈。然后用蒸餾水和甲苯使紅細(xì)胞破裂,釋放出血紅蛋白。

（2）得到血紅蛋白混合液之后,可先用離心法進(jìn)行樣品的處理及粗分離，再通過(guò)__________法進(jìn)一步純化。使用該方法純化時(shí)，首先分離得到大分子蛋白質(zhì)的原因是_______________。

（3）用凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量時(shí)，需要在凝膠中加入SDS，目的是______________________，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。

（4）若要分解血紅蛋白，需要用到蛋白酶。固定化酶常用____________法，將酶進(jìn)行固定化的優(yōu)點(diǎn)是______________________。

Answer 1

【答案】生理鹽水??? 上清液不再呈現(xiàn)黃色??? 凝膠色譜??? 相對(duì)分子量較大的蛋白質(zhì)不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，移動(dòng)速度較快??? 掩蓋不同蛋白質(zhì)間的電荷差別??? 化學(xué)結(jié)合或物理吸附法??? 方便回收和重復(fù)利用???

【解析】

1、選哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)材料的原因（1）動(dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，不但省去了去除細(xì)胞壁的麻煩，而且無(wú)細(xì)胞壁的支持、保護(hù)，細(xì)胞易吸水漲破。（2）哺乳動(dòng)物和人成熟的紅細(xì)胞，沒有細(xì)胞核和具有膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器，易用離心分離法得到不摻雜細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)的純凈的細(xì)胞膜。
2、血紅蛋白質(zhì)的提取和分離：
（1）原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。
（2）血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白溶液。（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面一洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)。（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
3、電泳法是利用待測(cè)樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異和分子本身的大小、形狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離或鑒定。

（1）從哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中提取血紅蛋白時(shí)，首先要用相當(dāng)于紅細(xì)胞液體體積五倍的生理鹽水洗滌紅細(xì)胞3次，直至上清液不再呈現(xiàn)黃色，然后用蒸餾水和甲苯使紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白。
（2）得到血紅蛋白混合液之后，可先用離心法進(jìn)行樣品處理及粗分離，再通過(guò)凝膠色譜法進(jìn)一步純化。凝膠色譜法的原理：分子量大的分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢，因此先從色譜柱洗脫出來(lái)的是大分子蛋白質(zhì)。
（3）用凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)分子量時(shí)，需要在凝膠中加入SDS，目的是消除凈電荷對(duì)遷移率的影響（或掩蓋不同種蛋白間的電荷差別），使電泳遷移率完全取決于分子的大小。
（4）固定化酶常用化學(xué)結(jié)合或物理吸附法，將酶進(jìn)行固定化的優(yōu)點(diǎn)是方便回收和重復(fù)利用。