Question

【題目】家蠶細胞具有高效表達外源基因能力，將人干擾素基因?qū)�入家蠶細胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可以提取干擾素用于制藥。請回答：

（1）采用PCR技術(shù)可擴增干擾素基因。該PCR反應體系的主要成分應該包含：擴增緩沖液（含Mg2+）、水、4種脫氧核苷酸、模板DNA、ATP、________和酶。PCR技術(shù)采用_______方法打開DNA雙鏈。

（2）在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，能以干擾素基因產(chǎn)生的mRNA作為模板按照________原則獲得cDNA片段。

（3）進行轉(zhuǎn)基因操作前，需用________酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞。

（4）基因工程常用質(zhì)粒作為運載體，理由是_________________（寫出3點）。

（5）將目的基因?qū)�入動物細胞最常用的方法�?/span>_________。此方法的受體細胞多是_________。

Answer 1

【答案】對干擾素基因特異性的DNA引物對 加熱到90-95℃ 堿基互補配對原則 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 有多個限制酶切位點、能在受體細胞中穩(wěn)定保存并復制、有標記基因 顯微注射技術(shù) 受精卵

【解析】

1、PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。

2、基因工程中最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨立于細菌擬核DNA之外，并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。

3、將目的基因?qū)�入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)，此方法的受體細胞多是受精卵。

（1）利用PCR技術(shù)可擴增干擾素基因需要有模板DNA、四種脫氧核苷酸、對干擾素基因特異性的DNA引物對、熱穩(wěn)定DNA聚合酶,ATP；PCR通過加熱到90-95℃將DNA雙鏈解旋。

（2）逆轉(zhuǎn)錄作用是以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用，按照堿基互補配對的原則獲得cDNA分子。

（3）動物細胞培養(yǎng)需要用胰蛋白酶時處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞。

（4）質(zhì)粒作為運載體的條件：質(zhì)粒具有能在受體細胞中穩(wěn)定保存并復制、具有多個限制酶切割位點、具有標記基因等特點。

（5）將目的基因?qū)�入動物細胞最常用的方法是顯微注射技術(shù)；多選擇動物受精卵作為受體細胞。