Question

【題目】2015年，屠呦呦因發(fā)現(xiàn)青蒿素治療瘧疾的新療法獲獎(jiǎng)．工業(yè)上青蒿素一般從青蒿植株中提取，產(chǎn)量低，價(jià)格高．基因工程及細(xì)胞工程等為培育出高青蒿素含量的青蒿提供了思路．科學(xué)家先通過紫外線處理大量青蒿幼苗后，偶然發(fā)現(xiàn)一株高產(chǎn)植株．通過基因測序發(fā)現(xiàn)該高產(chǎn)植株控制青蒿素合成相關(guān)的一種關(guān)鍵酶的基因發(fā)生了突變．

（1）提取了高產(chǎn)植株的全部DNA后，要想快速大量獲得該突變基因可以采用PCR技術(shù)，該技術(shù)的原理是 ．

（2）如果用青蒿某個(gè)時(shí)期mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的雙鏈cDNA片段，用該雙鏈cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，進(jìn)行了30個(gè)循環(huán)后，理論上可以產(chǎn)生約為 個(gè)DNA分子，該雙鏈與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)受體菌群就叫做青蒿的 ，獲得的cDNA與青蒿細(xì)胞中該基因堿基序列 （填“相同”或“不同”）．

（3）將獲得的突變基因?qū)�入普通青蒿之前，先�?gòu)建基因表達(dá)載體，圖l、2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．請回答：

用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是 ，構(gòu)建好的重組質(zhì)粒在其目的基因前要加上特殊的啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是 識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)．

（4）檢測目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)，應(yīng)采取 技術(shù)．目的基因?qū)�入組織細(xì)胞后，通過 技術(shù)培育出青蒿幼苗．

Answer 1

【答案】（1）DNA雙鏈復(fù)制

（2）230cDNA文庫（或部分基因文庫） 不同

（3）SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因（答對一個(gè)即得分） RNA聚合酶

（4）抗原抗體雜交 植物組織培養(yǎng)

【解析】試題分析：（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的原理為DNA雙鏈復(fù)制．

（2）由于PCR技術(shù)利用的是DNA雙鏈復(fù)制的原理，因此用該雙鏈cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，進(jìn)行了30個(gè)循環(huán)后，理論上可以產(chǎn)生約為230個(gè)DNA分子；又由于該基因庫是由青蒿某個(gè)時(shí)期mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的雙鏈cDNA片段，因此只包含某種生物的部分基因，因此該雙鏈與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中，這個(gè)受體菌群就叫做青蒿的cDNA文庫（或部分基因文庫）．通過逆轉(zhuǎn)錄得到的目的基因中缺少基因結(jié)構(gòu)中的非編碼區(qū)以及編碼區(qū)的內(nèi)含子，因此獲得的cDNA與青蒿細(xì)胞中該基因堿基序列不同．

（3）分析圖2可知，目的基因和抗生素抗性基因中含有SmaⅠ限制酶的切割位點(diǎn)，因此用SmaⅠ切割圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因．構(gòu)建好的重組質(zhì)粒在其目的基因前要加上特殊的啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)．

（4）檢測目的基因是否表達(dá)出相應(yīng)蛋白質(zhì)，應(yīng)采取抗原抗體雜交技術(shù)技術(shù)．目的基因?qū)�入組織細(xì)胞后，通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育出青蒿幼苗．

故答案為：（1）DNA雙鏈復(fù)制

（2）230cDNA文庫（或部分基因文庫） 不同

（3）SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因及外源DNA中的目的基因（答對一個(gè)即得分） RNA聚合酶

（4）抗原抗體雜交 植物組織培養(yǎng)