Question

（2013天津卷）9.（15分）花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質(zhì)體可使其染色體片段化，并喪失再生能力。再利用此原生質(zhì)體作為部分遺傳物質(zhì)的供體與完整的花椰菜原生質(zhì)體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株。流程如下圖。

據(jù)圖回答下列問題：

（1）過程①所需的酶是                               。

（2）過程②后，在顯微鏡下觀察融合的活細(xì)胞中有供體的          存在，這一特征可作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。

（3）原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是       。原生質(zhì)體經(jīng)過          再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。

（4）若分析再生植株的染色體變異類型，應(yīng)剪取再生植株和               植株的根尖，通過          、          、染色和制片等過程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。

（5）采用特異性引物對花椰菜和黑芥基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到兩親本的差異性條帶，可用于雜種植株的鑒定。下圖是用該引物對雙親及再生植株1—4進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果。據(jù)圖判斷，再生植株1—4中一定是雜種植株的有          。

（6）對雜種植株進(jìn)行          接種實(shí)驗(yàn)，可篩選出具有高抗性的雜種植株。

Answer 1

【答案】（1）纖維素酶和果膠酶            

（2）葉綠體

（3）保持原生質(zhì)體完整性       細(xì)胞壁

（4）雙親（或花椰菜和黑芥）          解離              漂洗

（5）1、2、4                      （6）黑腐病菌

【解析】

（1）過程①表示原生質(zhì)體的制備，要用纖維素酶和果膠酶去掉植物細(xì)胞的細(xì)胞壁

（2）用于融合的兩個(gè)細(xì)胞，一個(gè)是黑芥苗的葉肉細(xì)胞，一個(gè)是花椰菜的根部細(xì)胞，其中供體細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)是葉綠體，可通過觀察葉綠體的有無作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。

（3）原生質(zhì)體沒有細(xì)胞壁的保護(hù)，需要加入適宜濃度的甘露醇以保證滲透壓的穩(wěn)定，以避免原生質(zhì)體吸水或失水破壞原生質(zhì)體的完整性；原生質(zhì)體通過細(xì)胞壁雜聲形成雜種細(xì)胞，進(jìn)而形成愈傷組織。

（4）分析再生植株染色體變異類型，需要將再生植株細(xì)胞染色體和黑芥苗與花椰菜細(xì)胞中的染色體制片觀察進(jìn)行比較，制片的基本程序是解離、漂洗、染色、制片。

（5）根據(jù)圖譜，花椰菜含有堿基對為300和600的DNA片段，黑芥還有堿基對為1000、1300和1500的片段，再生植株3,只含有長度為300和600的片段，與花椰菜一致，1、2、4既含有花椰菜DNA片段，又含有黑芥DNA片段，為雜種植株。

（6）對雜種植株接種黑腐病菌，能正常生長的即為具有高抗性的雜種植株。