Question

【題目】重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，通過多次PCR擴(kuò)增，從而獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴(kuò)增較長片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點(diǎn)誘變等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。右圖是利用重疊延伸PCR技術(shù)擴(kuò)增某目的基因的過程。其主要沒計(jì)思路是用具有互補(bǔ)配對(duì)片段的引物（圖中引物2、引物3），分別PCR，獲得有重疊鏈的兩種 DNA片段，再在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過重疊鏈的延伸獲得目的基因。結(jié)合所學(xué)知識(shí)，分析下列問題。

（1）引物中G+C的含量影響著引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性，引物中G+C的含量越高，結(jié)合穩(wěn)定性______。

（2）在第一階段獲得兩種具有重疊片段DNA的過程中，必須將引物l、2和引物3、4置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中，這是因?yàn)?/span>________。

（3）若在引物l和引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、引物4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均復(fù)制一次，共產(chǎn)生________種雙鏈DNA分子。

（4）在引物1、引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過________ 次復(fù)制。

（5）若利用微生物擴(kuò)增該目的基因，其基本步驟包括：________、________、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取目的基因。

Answer 1

【答案】

（1）越高

（2）吸引物2和吸引物3存在互補(bǔ)配對(duì)片段，置于同一反應(yīng)系統(tǒng)中它們會(huì)發(fā)生結(jié)合而失去作用

（3）3

（4）2

（5）基因表達(dá)載體的構(gòu)建 將目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞

【解析】

（1）由于一個(gè)C-C之間有三個(gè)氫鍵，而一個(gè)A-T之間有兩個(gè)氫鍵，所以引物中C+C含量越高，引物與模板DNA的結(jié)合就越穩(wěn)定．

（2）從圖中可以看出，引物2和引物3相應(yīng)的堿基之間可以進(jìn)行配對(duì)，所以如果將引物2和3放在一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中，則會(huì)引起引物2和3 的失效．

（3）兩個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中各自形成兩種DNA分子，但由于引物1和引物4形成兩個(gè)與原DNA相同的DNA分子，所以含有引物1和4的DNA屬于同一種DNA，故總共形成三種DNA分子．

（4）第一次復(fù)制形成的兩個(gè)DNA分子分別含有引物1和引物2，圖中第一階段形成的DNA分子同時(shí)具有引物1和引物2，圖示雙鏈DNA分子至少要經(jīng)過第二次復(fù)制才能形成．

（5）利用微生物擴(kuò)增該目的基因，需要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，而導(dǎo)入受體細(xì)胞首先要將目的基因與載體結(jié)合．