Question

【題目】科學(xué)家嘗試使用Cre/loxP位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)，在檢測(cè)目的基因?qū)�入成功后，刪除轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞內(nèi)的抗除草劑基因。其技術(shù)過(guò)程如下(圖中的■代表基因前的啟動(dòng)子)，據(jù)圖回答：

(1) loxP是一種只有34個(gè)堿基對(duì)構(gòu)成的小型DNA片段，是有兩個(gè)13個(gè)堿基對(duì)反向重復(fù)序列和中間間隔的8個(gè)堿基對(duì)序列共同組成，自身不會(huì)表達(dá)，插入質(zhì)粒后也不影響原有基因的表達(dá)，其堿基序列如下：

Cre酶能特異性地識(shí)別此序列并在箭頭處切開(kāi)loxP，其功能類(lèi)似于基因工程中的________酶。從遺傳學(xué)角度分析，Cre酶改變質(zhì)粒產(chǎn)生的結(jié)果相當(dāng)于可遺傳變異中的________。

(2) 將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到植物細(xì)胞中最常用的方法是________________。作為標(biāo)記基因，抗除草劑基因用于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入成功的原理是________。

(3) 經(jīng)檢測(cè)成功后，抗除草劑基因已沒(méi)有用途，繼續(xù)留在植物體內(nèi)可能會(huì)造成的安全問(wèn)題是________。經(jīng)Cre酶處理后，質(zhì)粒中的兩個(gè)loxP序列分別被切開(kāi)后，可得到如上圖右側(cè)的這兩個(gè)DNA分子。由于________________的原因，抗除草劑基因不再表達(dá)，之后會(huì)在培養(yǎng)過(guò)程中消失。

(4) loxP序列是有方向性的。如果經(jīng)Cre酶處理后，發(fā)現(xiàn)抗除草劑基因反向連接在質(zhì)粒一上，則原來(lái)質(zhì)粒一中這兩個(gè)loxP序列的方向是________。

A．兩個(gè)都是正向

B．兩個(gè)都是反向

C．一個(gè)正向一個(gè)反向

D．與方向無(wú)關(guān)

Answer 1

【答案】(1) 限制酶 基因重組

(2) 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 抗除草劑基因和目的基因在同一個(gè)質(zhì)粒上

(3) 抗除草劑基因可能轉(zhuǎn)移到雜草中 抗除草劑基因前沒(méi)有了啟動(dòng)子 (4) C

【解析】：（1）限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，Cre酶能特異性地識(shí)別此序列并在箭頭處切開(kāi)loxP，其功能類(lèi)似于基因工程中的限制酶．從遺傳學(xué)角度分析，Cre酶改變質(zhì)粒產(chǎn)生的結(jié)果相當(dāng)于可遺傳變異中的基因重組。

（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到植物細(xì)胞中的方法有：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法、花粉管通道法，其中最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，由于抗除草劑基因和目的基因在同一個(gè)質(zhì)粒上，故抗除草劑基因可以用于檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入成功。

（3）經(jīng)檢測(cè)成功后，抗除草劑基因已沒(méi)有用途，繼續(xù)留在植物體內(nèi)可能會(huì)造成的安全問(wèn)題是抗除草劑基因可能轉(zhuǎn)移到雜草中，經(jīng)Cre酶處理后，質(zhì)粒中的兩個(gè)loxP序列分別被切開(kāi)后，可得到如上圖右側(cè)的這兩個(gè)DNA分子，基因表達(dá)載體的組成包括：目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因．由于抗除草劑基因前沒(méi)有了啟動(dòng)子的原因，因此抗除草劑基因不再表達(dá)，之后會(huì)在培養(yǎng)過(guò)程中消失。

（4）loxP序列是有方向性的．據(jù)圖分析，如果經(jīng)Cre酶處理后，發(fā)現(xiàn)抗除草劑基因反向連接在質(zhì)粒一上，則原來(lái)質(zhì)粒一中這兩個(gè)loxP序列的方向是一個(gè)正向一個(gè)反向。