Question

【題目】【生物——選修3:現(xiàn)代生物科技專題】為增加油菜種子的含油量，科研人員將轉運肽基因與酶D基因相連，導人油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種。

（1）研究人采用PCR技術獲取酶D基因和轉運肽基因，該技術是利用 的原理，使相應基因呈指數增加。所含三種限制酶（XbaI、ClaI、SacI）的切點如圖所示，則用 和

（2）將上述融合基因插人上圖所示Ti質粒的 中，構建基因表達載體并導人農桿菌中。為了獲得含融合基因的單菌落，應進行的操作是 。隨后再利用液體培養(yǎng)基將該單菌落振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的侵染液。

（3）剪取油菜的葉片放人侵染液中一段時間，此過程的目的是 ，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，依據 的原理，可將其培育成轉基因油菜植株。

（4）用 法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達。

Answer 1

【答案】（1）DNA雙鏈復制 ClaⅠ DNA連接

（2）T-DNA（1分） 將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)

（3）利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞 細胞具有全能性

（4）抗原—抗體雜交

【解析】（1）PCR技術的原理是DNA雙鏈復制。提取轉運肽基因需要XbaI和ClaI，提取酶D基因需要ClaI和SacI，其中由ClaI切割形成的基因末端是相同的，故用ClaⅠ和DNA連接酶處理兩個基因后，可得到兩基因相連的融合基因。

（2）利用農桿菌轉化法導入目的基因，需要將目的基因插入農桿菌的Ti質粒的T-DNA中，所以構建基因表達載體需要將上述的融合基因插入Ti質粒的T-DNA中。重組Ti質粒上面有四環(huán)素抗性基因，所以篩選含有融合基因的單菌落需要將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

（3）剪取油菜的葉片放人侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞。進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞植物組織培養(yǎng)技術培育成轉基因油菜植株，該過程依據的原理是植物細胞具有全能性。

（4）基因表達的產物是蛋白質，故用抗原—抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達。