Question

紅細(xì)胞含有大量血紅蛋白，紅細(xì)胞的機(jī)能主要是由血紅蛋白完成，血紅蛋白的主要功能是攜帶O₂或CO₂，我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來(lái)提取和分離血紅蛋白。請(qǐng)回答下列有關(guān)問(wèn)題：

(1)血紅蛋白提取和分離的程序可分為四步：________、________、________和________。

(2)實(shí)驗(yàn)前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來(lái)，馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。

①加入檸檬酸鈉的目的是___________________________________________。

②在樣品處理中包括紅細(xì)胞的洗滌、__________________、分離血紅蛋白溶液、透析。

③洗滌紅細(xì)胞的目的是______________，你如何知道紅細(xì)胞已洗滌干凈？________________________________________________________________________

④分離紅細(xì)胞時(shí)對(duì)離心速度和離心時(shí)間的要求是____________________________。

⑤若離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)結(jié)果會(huì)怎樣？ ___________________________

________________________________________________________________________。

(3)收集的血紅蛋白溶液在透析袋中透析，這就是樣品的粗分離。

①透析的目的是____________________________________________。

②透析的原理是______________________________________________________。

(4)然后通過(guò)凝膠色譜法將樣品進(jìn)一步純化，最后經(jīng)SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。

①樣品純化的目的是__________________________________________________。

②血紅蛋白有什么特點(diǎn)？___________________________________________________。

這一特點(diǎn)對(duì)進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離有什么意義？______________

________________________________________________________________________。

 

Answer 1

(1)樣品處理　粗分離　純化　純度鑒定　

(2)①防止血液凝固　②血紅蛋白的釋放�、廴コ�雜蛋白　離心后的上清液沒(méi)有黃色�、艿退俣虝r(shí)間離心，如500 r/min離心2 min�、蓦x心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度　(3)①去除相對(duì)分子量較小的雜質(zhì)�、谕肝龃�能使小分子自由進(jìn)出，而大分子則保留在袋內(nèi)　(4)①通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜蛋白除去�、谘�紅蛋白呈現(xiàn)紅色　在凝膠色譜分離時(shí)可通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液，這使血紅蛋白的分離過(guò)程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作

分離提取血紅蛋白的實(shí)驗(yàn)流程大致是樣品處理—粗分離—純化—純度鑒定四個(gè)步驟。檸檬酸鈉屬于抗凝劑。血紅蛋白是紅色含鐵的蛋白質(zhì)。凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)是依據(jù)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量大小來(lái)進(jìn)行的。