Question

17．如圖表示為平板劃線法分離純化細(xì)菌示意圖．根據(jù)所學(xué)生物學(xué)知識(shí)，完成下列問題．

（1）微生物所需的營養(yǎng)成分包括碳源、氮源、水和無機(jī)鹽．
（2）培養(yǎng)微生物時(shí)，除考慮微生物生長所需的營養(yǎng)外，還要考慮微生物生長所需的溫度、pH以及是否需要O₂等．
（3）若要從環(huán)境中分離純化出所用的微生物，則具體方法應(yīng)是：
第一步：配制培養(yǎng)基．該培養(yǎng)基必須含有微生物生長所需要的基本營養(yǎng)成分．
第二步：滅菌．對(duì)培養(yǎng)基用高壓蒸汽方法進(jìn)行滅菌．
第三步：接種．在固體培養(yǎng)基上，微生物常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
第四步：培養(yǎng)．在適宜溫度下培養(yǎng)．一般用平板倒置的方法進(jìn)行培養(yǎng)，這樣可以防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染．      
 第五步：挑選符合要求的菌落．
（4）做如圖所示的操作時(shí)，為保證每次劃線都從上次劃線末端的微生物濃度開始，所以每次劃線前都要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌，平板劃線結(jié)束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線相交（相接、相連、交叉等）．
（5）脲酶可以將尿素分解為氨，從而使尿素溶液pH升高，這可用酚酞試劑來檢驗(yàn)．用纖維素做唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到的纖維素分解菌中可能還混雜有自養(yǎng)微生物（硝化細(xì)菌）．
（6）抗生素可以抑制肽聚糖合成，從而可以抑制多數(shù)原核生物繁殖．實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有酵母菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌三種微生物混雜生長的固體培養(yǎng)基，已知大腸桿菌菌落遇伊紅-美藍(lán)試劑變?yōu)樽仙�，并帶有金屬光澤；金黃色葡萄球菌耐高濃度食鹽水，菌落為金黃色；酵母菌細(xì)胞壁成分主要為幾丁質(zhì)，營養(yǎng)條件好，氧氣充足，顯微鏡下可見典型的出芽生殖．現(xiàn)在請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)合理的實(shí)驗(yàn)方案，從一個(gè)培養(yǎng)基中，將三種微生物一次分離開來．（所需試劑可自選）
實(shí)驗(yàn)方案：根據(jù)菌落顏色，首先分離出金黃色葡萄球菌，然后向培養(yǎng)基中加入伊紅-美藍(lán)，將變?yōu)樽仙�，帶有金屬光澤的菌落分離出來，得到大腸桿菌，然后加入非磺胺類抗生素如青霉素，將培養(yǎng)基中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺死，得到酵母菌．

Answer 1

分析 本題考查多為識(shí)記內(nèi)容，如培養(yǎng)基的成分、微生物生長條件、常用的滅菌方法等：平板劃線法時(shí)如果劃線相重合則不能分離出純種；酚酞可檢驗(yàn)堿性溶液，用纖維素做唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到纖維素分解菌，但自養(yǎng)菌可以利用空氣中的二氧化碳，也能生存，需要進(jìn)一步分離，根據(jù)條件可以將不同菌分離開來．

解答 解：（1）微生物的營養(yǎng)物質(zhì)主要包括體液、氮源、水和無機(jī)鹽等．
（2）培養(yǎng)微生物時(shí)，除考慮微生物生長所需的營養(yǎng)外，還要考慮微生物生長所需的溫度、pH及是否需要O₂等．
（3）第二步：培養(yǎng)基常采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．
第三步：固體培養(yǎng)基上的接種方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法．
第四步：在適宜溫度下培養(yǎng)微生物．為防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染，一般用平板倒置的方法．
（4）平板劃線操作時(shí)為保證每次劃線都從上次劃線末端的微生物濃度開始，所以每次劃線前都要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌．最后一次劃的線不能與第一次劃的線相交．
（5）脲酶可以將尿素分解為氨，從而使尿素溶液pH升高，酚酞可檢驗(yàn)堿性溶液．用纖維素做唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物，得到纖維素分解菌，但自養(yǎng)菌可以利用空氣中的二氧化碳，也能生存，需要進(jìn)一步分離．
（6）根據(jù)題意，該實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)該設(shè)計(jì)為：根據(jù)菌落顏色，首先分離出金黃色葡萄球菌，然后向培養(yǎng)基中加入伊紅-美藍(lán)，將變?yōu)樽仙�，帶有金屬光澤的菌落分離出來，得到大腸桿菌，然后加入非磺胺類抗生素如青霉素，將培養(yǎng)基中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺死，得到酵母菌．
故答案為：
（1）碳源    　氮源       
（2）pH
（3）高壓蒸汽　  平板劃線法  　稀釋涂布平板法　  　平板倒置  
培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基造成污染
（4）對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌　相交（相接、相連、交叉等）
（5）酚紅指示劑　自養(yǎng)微生物（硝化細(xì)菌）
（6）方案：根據(jù)菌落顏色，首先分離出金黃色葡萄球菌，然后向培養(yǎng)基中加入伊紅-美藍(lán)，將變?yōu)樽仙�，帶有金屬光澤的菌落分離出來，得到大腸桿菌，然后加入非磺胺類抗生素如青霉素，將培養(yǎng)基中的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌殺死，得到酵母菌．（分離順序不唯一，答案合理即可）

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖示主要考查微生物的培養(yǎng)基制作、接種、分離等知識(shí)，意在強(qiáng)化學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)的識(shí)記、理解與運(yùn)用．