Question

【題目】石油烴是石油管道泄漏的主要污染物。為了篩選出分解石油烴能力較強(qiáng)的微生物，進(jìn)行了如下系列操作。請(qǐng)回答問題：

（1）分解石油烴的微生物一般從土壤中分離，獲取土壤樣品的取樣地點(diǎn)最好選在_____________。

（2）圖1表示獲取土壤樣品后的研究過程。

為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，①③號(hào)瓶所用的液體培養(yǎng)基的成分共有的特點(diǎn)是________，從而有利于分解石油烴的微生物的生長(zhǎng)。

（3）可采用圖2中平板乙所示的____________(方法）檢測(cè)圖1的③號(hào)瓶中分解石油烴的微生物數(shù)量。在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是_____________；然后，將圖1③號(hào)瓶中的1mL菌液稀釋100倍，在3個(gè)平板上用該方法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每毫升該菌液中的活菌數(shù)為______________個(gè)。

（4）Ⅰ.若實(shí)驗(yàn)室采用圖3中的操作分離純化優(yōu)良菌種，首次接種最合理的排序是_________。

Ⅱ.下列有關(guān)操作正確的是______________（填字母）。

A.劃線分離時(shí)，需要把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進(jìn)行接種

B.劃線時(shí)要將最后一區(qū)域的劃線與第一區(qū)域的劃線相連

C.超凈工作臺(tái)在使用前，可用紫外線燈殺菌

Answer 1

【答案】 被石油污染處 以石油烴為唯一碳源 稀釋涂布平板法 檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否合格 3.8×104 ②①④①③② C

【解析】試題分析：本題的知識(shí)點(diǎn)是微生物培養(yǎng)過程中的無菌技術(shù)，分離微生物的常用的接種方法和接種操作過程，主要考查學(xué)生能理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。為篩選某種特定的微生物，常用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行初步篩選，要篩選能分解石油的的微生物，就應(yīng)該以石油為唯一碳源。不能分解石油的微生物由于無法獲得碳源而死亡。在微生物的純化培養(yǎng)過程中需要接種，接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，并在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的子細(xì)胞群體--菌落。

（1）要獲取相應(yīng)的菌種，應(yīng)到相應(yīng)的環(huán)境中獲取，獲取土壤樣品的取樣地點(diǎn)最好選在被石油污染明顯處。

（2）為了能有效地分離出分解石油烴的微生物，過程①一④所用培養(yǎng)基，其成分的特點(diǎn)是以石油烴為唯一碳源，從而有利于目的菌的生長(zhǎng)，抑制其他微生物的生長(zhǎng)。

（3）據(jù)圖乙可以看出，圖乙平板的菌落基本呈均勻分布，所用操作方法為稀釋涂布平板法。在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，這樣做的目的是檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否合格，3個(gè)平板上的平均菌落數(shù)分別為（39+38+37）/3=38個(gè)，因此每毫升該菌液中的活菌數(shù)為（C/V）×M=（38/0.1）×100=3.8×104個(gè)。

（4）I．平板劃線的操作的基本步驟是：右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，即圖中的②；待涼后，在火焰旁打開盛有菌液的試管棉塞，并將試管口過火焰，即圖中的①；將以冷卻的接種環(huán)伸入菌液，沾取一環(huán)菌液，即圖中的④；將試管口過火焰并塞上棉塞，即圖中的①；左手斜持瓊脂平板，并將皿蓋打開一條縫，右手于火焰近處將接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面，即圖中的③；燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留菌液，即圖中的②；待冷卻后從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)內(nèi)劃線，重復(fù)以上操作，在第三四五區(qū)內(nèi)劃線，注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。故正確的順序是②①④①③②。

II．劃線分離時(shí)，不能把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進(jìn)行接種，只能在培養(yǎng)基表面進(jìn)行劃線操作，A錯(cuò)誤；劃線時(shí)最后一區(qū)的劃線不能與第一區(qū)的劃線相連，B錯(cuò)誤；超凈工作臺(tái)在使用前，可用紫外線燈照射30分鐘，以殺死物體表面或空氣中的微生物，C正確。