Question

【題目】一種新型融合蛋白蜂毒素一SP94，具有較好的靶向性和毒素活性，為肝癌的靶向性治療提供了新的思路。它是將蜂毒素與SP94組合序列優(yōu)化改造成熟，再轉(zhuǎn)換成序列長(zhǎng)度為150bp的DNA序列并與pET32a質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體，流程如下圖。在大腸桿菌中，重組質(zhì)粒能表達(dá)出新型融合蛋白蜂毒素一SP94。請(qǐng)回答。

pET32a蜂毒素SP94表達(dá)載體構(gòu)建流程圖

（1）根據(jù)蜂毒素和SP94成熟肽的________序列，先將該序列轉(zhuǎn)換成________，再通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到________片段。要獲得大量的該片段可以通過(guò)_____技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）將目的基因片段和質(zhì)粒用限制酶_________進(jìn)行雙酶切，回收目的基因片段與質(zhì)粒的片段，用___________連接，得到含有目的基因的重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入經(jīng)_________處理過(guò)的大腸桿菌細(xì)胞培養(yǎng)。

（3）為了鑒別受體細(xì)胞中是否導(dǎo)入質(zhì)粒，可用含_____的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。從篩選出的大腸桿菌中，獲取質(zhì)粒并對(duì)其進(jìn)行酶切鑒定，雙酶切后，若測(cè)到長(zhǎng)度為_________DNA片段，就說(shuō)明該大腸桿菌中的質(zhì)粒含有目的基因。

Answer 1

【答案】氨基酸 mRNA Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因 PCR KpnⅠ和XhoⅠ DNA連接酶 Ca2+處理過(guò) 氨芐青霉素 150bp

【解析】

基因工程的基本操作程序

1、目的基因的獲取：原核基因采取直接分離獲得；真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法；PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。

2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建

3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞

4、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)

（1）從圖中看出，目的基因的獲取是通過(guò)人工合成，成熟肽的基本組成單位是氨基酸，所以可以根據(jù)其氨基酸序列轉(zhuǎn)換成mRNA序列，通過(guò)你轉(zhuǎn)款獲得DNA片段（Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因）。要獲得Mel-Sp94（蜂毒素-SP94）基因可以通過(guò)PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）比較重組質(zhì)粒和正常質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)，可以分析出用限制酶KpnⅠ和XhoⅠ切割的目的基因片段和質(zhì)粒，形成相同的黏性末端，在用DNA連接酶進(jìn)行連接，轉(zhuǎn)入大腸桿菌之前需要用Ca2+處理受體細(xì)胞。

（3）該質(zhì)粒上有氨芐青霉素作為標(biāo)記基因，所以可以在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。從題干中看出目的基因的序列有150bp。