Question

4．某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請(qǐng)回答下列問題：

（1）若利用PCR技術(shù)獲取抗鹽基因，需利用引物尋找抗鹽基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增．
（2）將含有抗鹽基因的煙草細(xì)胞培養(yǎng)為煙草植株需借助植物組織培養(yǎng)技術(shù)．
（3）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalⅠ和HindⅢ兩種酶對(duì)質(zhì)粒和抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的惟一性．
（4）為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的抗鹽基因作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用一定濃度的鹽水澆灌方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性．

Answer 1

分析 分析圖1：圖示為轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程，首先構(gòu)建基因表達(dá)載體；其次采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（煙草細(xì)胞）；再采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將含有目的基因的煙草細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草．

解答 解：（1）若利用PCR技術(shù)獲取抗鹽基因，需利用引物尋找抗鹽基因的位置并進(jìn)行擴(kuò)增．
（2）將含有抗鹽基因的煙草細(xì)胞培養(yǎng)為煙草植株需借助植物組織培養(yǎng)技術(shù)．
（3）質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點(diǎn)，其中BamHI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會(huì)破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會(huì)導(dǎo)致目的基因與運(yùn)載體反向連接；因此在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalI和HindIII兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒和含有抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（4）為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的抗鹽基因作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用一定濃度的鹽水澆灌方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性．
故答案為：
（1）引物                 
（2）植物組織培養(yǎng)
（3）SalⅠ和 HindⅢ
（4）抗鹽基因   一定濃度的鹽水澆灌（或“移栽到鹽堿地中”）

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程圖，考查基因工程、植物組織培養(yǎng)等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，能根據(jù)圖中限制酶的位置及題干要求選擇正確的限制酶；能根據(jù)題中信息判斷培養(yǎng)基中抗生素的名稱；識(shí)記植物組織培養(yǎng)過程及條件．