Question

【題目】醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，人體肝細(xì)胞中產(chǎn)生的抗凝血酶Ⅲ在抗凝血、防血栓方面具有重要作用。研究人員通過培育山羊乳腺生物反應(yīng)器大量生產(chǎn)抗凝血酶Ⅲ。請回答下列問題：

(1)應(yīng)從人的肝細(xì)胞中提取并分離mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成單鏈DNA。根據(jù)已知的抗凝血酶Ⅲ基因的堿基序列設(shè)計(jì)特異性________，經(jīng)PCR和電泳，可得到大量抗凝血酶Ⅲ基因，此過程所用原料為__________。

(2)重組后的人抗凝血酶Ⅲ基因表達(dá)載體由山羊β-酪蛋白基因啟動子、抗凝血酶Ⅲ基因、標(biāo)記基因和終止子組成，其中__________決定了人抗凝血酶Ⅲ基因只能在山羊乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)。

(3)山羊的ES細(xì)胞來自早期胚胎干細(xì)胞。在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)時(shí)，ES細(xì)胞具有________的特性。將重組人抗凝血酶Ⅲ基因表達(dá)載體包埋在由磷脂雙分子層構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)并轉(zhuǎn)染ES細(xì)胞時(shí)，目的基因表達(dá)載體進(jìn)入ES細(xì)胞的方式為__________。

(4)對山羊進(jìn)行同期發(fā)情和超數(shù)排卵處理，得到代孕母羊和多個(gè)卵母細(xì)胞，當(dāng)卵母細(xì)胞培養(yǎng)至_______________時(shí)，可去核并移入上述ES細(xì)胞的細(xì)胞核，完成核移植。為選擇雌性胚胎，可在囊胚時(shí)取___________細(xì)胞做DNA分析用以鑒定性別。檢測羊奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ的方法是_________。

Answer 1

【答案】引物 4種脫氧核苷酸 山羊β-酪蛋白基因啟動子 只分裂不分化 胞吞 MⅡ中期 滋養(yǎng)層 抗原-抗體雜交

【解析】

（1）基因是有遺傳效應(yīng)的DNA片段；PCR技術(shù)是一種在生物體外復(fù)制特定DNA片斷的核酸合成技術(shù)；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物（兩種）。
（2）啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。
（3）哺乳動物的胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞，是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，在飼養(yǎng)層上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中，能夠維持只分裂不分化的狀態(tài)。
（4）減Ⅱ中期的卵母細(xì)胞具備受精能力，細(xì)胞質(zhì)中合成的與分裂、分化有關(guān)的物質(zhì)能刺激融合后的重組細(xì)胞進(jìn)行分裂分化，進(jìn)而形成重組胚胎，因此核移植時(shí)常選用MⅡ中期的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞。
（5）囊胚時(shí)期的滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞將來發(fā)育成胎兒的各種組織，可利用囊胚的滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行性別鑒定。

(1) 依題意可知：抗凝血酶Ⅲ基因?qū)儆谀康幕�因，合成目的基因的原料�?/span>4種脫氧核苷酸，因此利用PCR技術(shù)擴(kuò)增抗凝血酶Ⅲ基因時(shí)，需要根據(jù)已知的抗凝血酶Ⅲ基因的堿基序列來設(shè)計(jì)特異性引物，所用原料為4種脫氧核苷酸。

(2) 啟動子能夠啟動基因的轉(zhuǎn)錄，重組人抗凝血酶Ⅲ基因表達(dá)載體中的山羊β-酪蛋白基因啟動子決定了人抗凝血酶Ⅲ基因只能在山羊乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)。

(3)在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)時(shí)，ES細(xì)胞具有只分裂不分化的特性。將重組人抗凝血酶Ⅲ基因表達(dá)載體包埋在由磷脂雙分子層構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)并轉(zhuǎn)染ES細(xì)胞時(shí)，脂質(zhì)體類似于囊泡，因此目的基因表達(dá)載體進(jìn)入ES細(xì)胞的方式為胞吞。

(4) 卵母細(xì)胞需要培養(yǎng)至MⅡ中期時(shí)才具備受精的能力，因此將培養(yǎng)至該時(shí)期的卵母細(xì)胞可去核并移入上述ES細(xì)胞的細(xì)胞核，完成核移植。囊胚時(shí)期的滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞將來發(fā)育成胎兒的各種組織�？梢姡瑸檫x擇雌性胚胎，可在囊胚時(shí)取滋養(yǎng)層細(xì)胞做 DNA（基因）分析用以鑒定性別。抗凝血酶Ⅲ的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，因此檢測羊奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ的方法是抗原-抗體雜交。